IL-7レセプターによるTCRγ遺伝子のV-J組換え誘導機構

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10167209
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 生田 宏一 京都大学, 医学研究科, 助教授 (90193177)
• Keywords: STAT / サイトカインレセプター / V-J組換え / 転写誘導

Research Abstract

1. STAT5によるTCRγ遺伝子のgermline転写誘導機構
まず、IL-3依存性のBa/F3細胞においてもTCγ遺伝子のgermline転写が見られることを確認した。さらに、構成的活性型STAT5Aを導入したBa/F3細胞ではIL-3なしでgermnline転写が誘導されていた。IL-7R cDNAが導入されたBa/F3細胞はIL-7でgermline転写が強く誘導された。また、このgermline転写はJγ1の上流より開始しており、転写開始点の上流-220bpから-80bpの間に3ケ所のSTAT結合モチーフが存在していた。さらに、gel mobility shift assayにより、STAT5がこのモチーフに結合することが確認された。一方、この5′Jγ1領域1.1kbをレポーター遺伝子につなげBa/F3細胞に導入すると、STAT5依存的およびIL-3依存的に転写が活性化された。また、これら3ヶ所のSTAT結合モチーフに突然変異を導入したDNAでは、STAT5依存的な転写活性が消失した。
2. 活性型STAT5によるγδT細胞の分化誘導
次に、IL-7R欠損マウスのT前駆細胞にレトロウイルスを用いてIL-7RやSTAT5を導入し、haging drop・胎児胸腺器官培養でT細胞に分化させた。まず、IL-7Rを導入したものでは、細胞数が劇的に増加し、γδT細胞も検出された。一方、活性型STAT5を導入したものでも、細胞数がある程度回復し、γδT細胞の分化が見られた。また、この時TCRγ遺伝子のV-J組換えも確認された。以上の結果より、IL-7Rのシグナル伝達分子の1つであるSTAT5がTCRγ遺伝子のgermline転写を誘導し、γ遺伝子座のrecombinaseに対するaccessibility上昇させV-J組換えを誘導するという可能性が支持された。

Research Products

• [Publications] Adachi, S.: "Essential role of IL-7 receptor α in the form Peyer's patch anlage." International Immunology. 10. 1-6 (1998)
• [Publications] Ishii, S.: "Impaired anaphylactic responses with intact sensitivity to endotoxin in mice lacking a platelet-activatine factor receptor." Journal of Experimental Medicine. 187. 1779-1788 (1998)
• [Publications] Kodaira, Y.: "Autigen-drived clonal accumulation of peritoneal γST cells in vivo." Immunological Investigations. (in press).
• [Publications] Sakiyama, T.: "Requirement of interleukin-5 for induction of autoimmune hemolytic anemia in the anti-red blood cell autoantibody Transgenic mice." International Immunology. (in press).