組換え受容体を用いた逆作用薬inverse agonistの検索

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10169219
• Research Institution: 福井医科大学
• Principal Investigator: 村松 郁延 福井医科大学, 医学部, 教授 (10111965)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 史子 福井医科大学, 医学部, 助手 (80291376) ; 谷口 隆信 福井医科大学, 医学部, 助教授 (60217130)
• Keywords: α_1アドレナリン受容体 / 逆作用薬 / inverse agonist / 中性拮抗薬 / neutral antagonist / upregulation

Research Abstract

ヒトα_<1a>アドレナリン受容体の第3細胞内ループにアミノ酸変異(271A1a/Thr)を導入したconstitutive active mutantを用いて,inverse agonist,neutral antagonistを検索し,以下の結果を得た。
1. 変異α_<1a>アドレナリン受容体はnoradrenalineなどagonistに対し野生型より約10倍高い親和性を示した。しかし,prazosinやKMD-3213などのantagonistに対する親和性には変化を認めなかった。
2. 変異受容体を発現したCHO細胞のIP3産生能はagonistを処置しなくても持続的に上昇していた。そして,この上昇はprazosinで抑制されたが,KMD-3213は影響せず,むしろprazosin作用に拮抗した。
3. 細胞の代謝状態を細胞近傍外液の酸性化率を指標に検出できるcytosensorを用いて調べたところ,prazosinは変異型のベースの酸性化率を低下させた。しかし,KMD-3213はベースの酸性化率に影響せず,parazosinの作用を遮断した。
4. parazosinなどのantagonistを培養培地中に加えておくことにより,変異型では著明な受容体密度の上昇(upregulation)を引き起こした。これに対し,KMD-3213はupregulationを惹起せず,prazosinによるupregulationを抑制した。
5. 以上の結果より,α_<1a>アドレナリン受容体のantagonistにはprazosinのようなinverse agonistと,KMD-3213のようなneutral antagonistが存在すること,前者の解析にはconstitutive active mutantが有用であることが明らかとなった。

Research Products

• [Publications] I.Muramatsu, S.Murata, M.Isaka, et al.: "α_1-Adrenoceptor subtypes and two receptor systems in vascular tissues." Life Science. 62(17/18). 1461-1465 (1998)
• [Publications] Y.Hiraoka, T.Taniguchi & I.Muramatsu: "Binding and functional characterization of α_1-adrenoceptor subtypes in the rat prostate." European Journal of Pharmacology. 366. 119-126 (1999)
• [Publications] S.Murata, T.Taniguchi & I.Muramatsu: "Pharmacological analysis of the novel, selective α_1-adrenoceptor antagonist, KMD-3213 and its suitability as a tritiated radioligand." British Journal of Pharmacology. 126 in press. (1999)
• [Publications] M.Takahashi, T.Taniguchi, S.Murata, et al.: "New α_1-adrenoceptor antagonist, JTH-601, shows more than 10times higher affinity for human prostates than arteries." Journal of Urology. 161 in press. (1999)
• [Publications] S.Nakamura, T.Taniguchi, F.Suzuki, et al.: "Evaluation of α_1-adrenoceptors in the rabbit iris : pharmacological characterization and expression of mRNA." British Journal of Pharmacology. in press. (1999)
• [Publications] T.Taniguchi, R.Inagaki, S.Murata, et al.: "Microphysiometric analysis of human α_<1a>-adrenoceptor expressed in CHO cell." British Journal of Pharmacology. in press. (1999)