1998 Fiscal Year Annual Research Report
酵母を用いた基本転写因子TFIIDサブユニット(TAFs)の機能解析
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10173221
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
古久保 哲朗 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教授 (10271587)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
笠原 浩司 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (40304159)
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| Keywords | 転写因子 / 基本転写因子 / 転写制御 / 転写 / 転写調節機構 / TFIID / TAF |
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| Research Abstract |
ショウジョウバエdTAF230/出芽酵母yTAF145はそのN末端側約70アミノ酸残基から成る領域にTBP機能阻害活性を有する。またこの活性領域(TAND;TAF N-terminal domain)は機能的に異なる二個の小サブドメイン(TANDI,TANDII)に分割されるが、TANDIと酸性型の転写活性化ドメイン(AD)はいくつかのアッセイ系において互いに交換可能(機能的に等価)である。一方、転写活性化において重要な役割を果たすとされる基本転写因子TFIIAは、TBPとの結合においてTANDIIに対して競合的に作用する。他のグループによるこれまでの知見も考え合わせて、新たにTFIIDの異性化モデル(ハンドオフモデル)を提唱した。
yTAF145のTANDI,II(yTANDI,II)をdTANDI,IIで置換したキメラ型TAF蛋白質は、出芽酵母細胞内において選択的な蛋白質分解を受ける。今回HA tagをN,C末端に付加することによって、この蛋白質分解がN末端側のキメラ型TANDを除去するために働いていることを明らかにした。さらに点変異体あるいはTAND重複型変異体を用いた実験から、AD,TFIIAによるTANDI,IIの逐次的な置換の阻害が蛋白質分解を誘起することが示唆された。また興味深いことにTANDはyTAF145分子のC末端側に移してもautonomousに機能するが、キメラ型TANDをC末端側に移した場合には蛋白質分解は起こらなかった。すなわちTANDの除去は特異的なプロテアーゼによる生理的な反応が顕在化したものと考えられる。またTAND欠失型yTAF_<II>145遺伝子に対して合成致死性を示す遺伝子のスクリーニングを行ったところ、TFIID,SAGAの構成成分であるTBP,TAF61及び機能未知のORFの点変異体が単離された。
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[Publications] Kotani T et al: "Identification of highly conserved amino-terminal segments of dTAFII230 and yTAFII145 that are functionally interchangeable for inhibiting TBP:DNA interactions in vitro and in promoting yeast cell growth in vivo" Journal of Biological Chemistry. 273(48). 32254-32264 (1998)
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[Publications] Liu D et al: "Solution structure of a TBP-TAFII230 complex: Protein mimicry of the minor groove surface of the TATA box unwound by TBP" Cell. 94(5). 573-583 (1998)
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[Publications] Drysdale CM et al: "The Gcn4p activation domain interacts specifically in vitro with RNA polymerase II holoenzyme, TFIID, and the Adap-Gen5p coactivator complex" Molecular and Cellular Biology. 18(3). 1711-1724 (1998)
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[Publications] Kokubo T et al: "Thr yeast TAF145 inhibitory domain and TFIIA competitively bind to TATA-binding protein" Moleculas and Cellular Biology. 18(2). 1003-1012 (1998)
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[Publications] Sakurai Y et al: "The cDNA cloning and molecular characterization of a snake venom platelet glycoprotein 1b-binding protein.Mamushigin.from Agkistrodon halys blomhoffii venom" Thromb.Haemost.79. 1199-1207 (1998)
