1998 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
10174210
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Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
Principal Investigator |
萩原 正敏 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (10208423)
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Keywords | mRNAファクトリー / SF2 / ASF / SRPK / speckled patterm |
Research Abstract |
SRPK1はSF2やSC35などのSRドメインをリン酸化する酵素として、1994年にGuiらがHela細胞よりSR蛋白リン酸化酵素を精製し、cDNAクローニングしたリン酸化酵素である。最近我々は、このSRPK1と分裂酵母の細胞周期制御遺伝子Dsk1の高い相同性に着目して、マウス脳mRNAより新規のSR蛋白リン酸化酵素をクローニングし、SRPK2と名付けている。大腸菌で発現させたSRPK1とSRPK2を用いて、GST-SF2 Pull-Down Kinase Assayを行うと、両酵素ともSF2/ASFに結合してリン酸化活性を示した。実際に細胞内でもSF2/ASFとSRPKが複合体を形成していることを、共沈実験で確かめている。このSF2/SRPK複合体の形成にはRSドメインが必須で、RSドメインのリン酸化状態により両者間の親和性が異なる。さらに面白いことには、CREB/CBP複合体形成とは逆に、リン酸化されていないSF2/ASFとSRPKは複合体を形成するが、リン酸化されたSF2/ASFとSRPKはもはや給合しなかった。これだけなら、単に、酵素と基質が結合したて、酵素反応が終わると解離するだけだとも理解できる。 SRPKなどSR蛋白をリン酸化する酵素を過剰発現させた細胞内で、核内speckle様構造が崩壊しSF2/ASFは核外に移行する現象が観察されていた。ところが、ATP結合部位を点突然変異により改変してリン酸化活性を喪失させたSRPK2^<K103R>をHela細胞内で発現させたところ、驚いたことに、核内でspeckled patternを示したいたSF2/ASFは核外に移行した。この現象から、SF2/ASFの核外移行は、本稿で述べてきたSF2/ASFとSRPKの複合体形成によるためではないかと考え、SRPK1のSF2結合部位欠損ミュータントSRPKl^<553-580>を作製し、同様にHela細胞内で発現させると、SF2/ASFは核内にとどまりspeckled patternを示した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Okamoto,Y.,Onogi,H.,Honda,R.,Yasuda,H.,Wakabayashi,T.,Nimura,Y.,& Hagiwara,M.: "cdc2 kinase-mediated phosphorylation of splicing factor SF2/ASF" Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1999)
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[Publications] Yoshida kazuhilo.Imaki Junko.Okamoto Yoshichika,Iwakabe Hideki.Fujisawa Hitoshi,Matsuda Akira,Nakanishi Shigetada,Matsuda Hidehiko, and Hagiwara M.: "CREB-induced transcriptional activation depends on mGluR6 in rod bipolar cells." Mol.Brain Res.57,. 241-247 (1998)
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[Publications] Shimomura Atsushi,Okamoto Yoshichika,Hirata Yoko,Kobayashi Makoto,Kawakami Kiyoshi,Kiuchi Kazutoshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Dominant Negative ATF1 Blocks Cyclic AMP-Induced Neurite Outgrowth in PC12D Cells." J.Neurochem.70,. 1029-1034 (1998)
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[Publications] Muro Yoshinao,Ogawa Yasushi,Kato Yoshihiro,Hagiwara M.: "Autoantibody to thioredoxin reductase in an ovarian cancer patient." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 267-271 (1998)
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[Publications] Kuroyanagi Noriyo,Onogi Hiroshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Novel SR-protein-specific kinase,SRPK2,disassembles nuclear speckles." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 357-364 (1998)
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[Publications] Kamimoto Takahiro,Nagai Yasuo,Onogi Hiroshi,Muro Yoshinao,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Dymple,a Novel Dynamin-like High Molecular Weight GTPase Lacking a Proline-rich C-terminal Domani in Mammalian Cells." J.Biol.Chem.273,(2),. 1044-1051 (1998)