ホスファチジン酸ホスファターゼの新しい機能と作用分子機構の解明

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10212207
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 加納 英雄 札幌医科大学, 医学部, 教授 (70045475)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 甲斐 正広 札幌医科大学, 医学部, 助手 (80260777) ; 和田 郁夫 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (40182969)
• Keywords: ホスファチジン酸 / ジアシルグリセロール / シグナル伝達 / リン脂質

Research Abstract

ヒトPAP-2aはTritonX-100可溶性であるが、CHAPS不溶性のラフトに存在することが分かった。一方、PAP-2bはTritonX-100不溶性であり、約50%がカベオラに存在する。2種のPAPのGolgi体から表面膜への輸送過程を検討した結果、2a,2b両者を含む小胞と、2bのみを含む小胞が観察された。2a,2bの小胞輸送系に相違があることを示している。ドメインスワッピングの結果、2bの最初の細胞外ループがTritonX-100不溶性のために必須であることが分かった。
2a,2b両者を安定発現するMDCK細胞株を樹立し、発現した酵素の細胞内局在性を調べた。PAP-2aの90%がapicalドメインに、またPAP-2bの70%がbasolateral側に、それぞれ分離して分布していた。ドメインスワッピング実験の結果、PAP-2aのapicalシグナルはF(2)DKTRL(7)のN端6残基と確定した。この配列はPDZ-結合配列であるが、タンパクのN-端に存在する初めての例である。一方、PAP-2bのbasolateralシグナルは第一番目の細胞側ループに存在するtyrosine-rich motifであることを確認できた。

Research Products

• [Publications] Hisao, Nagaya: "Diacylglycerol kinases supprisses ER-to-golgi traffic via its SAM and PH domains"Mol.Biol.Cell. 13. 302-316 (2002)
• [Publications] Hideo, Kanoh: "Diacylglycerol kinases"J.Biochem. (印刷中).