ポストゴルジ輸送ネットワークを担う機能素子としての分子群

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10215208
• Research Institution: Okazaki National Research Institutes
• Principal Investigator: 吉森 保 岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 助教授 (60191649)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 堀内 久徳 京都大学, 医学研究所, 助手 (90291426)
• Keywords: エンドソーム / オートファゴソーム / SKD1 / Beclin / Apg蛋白質 / 血小板 / 顆粒放出 / Rab4

Research Abstract

1)エンドソームとオートファゴソーム:SKD1がエンドソームから細胞膜やリソソームへの輸送を制御することを示してきたが、さらにオートファジーとも関係することが判明した。エンドソームからオートファゴソームに機能素子を輸送しているものと思われる。またBeclinがphosphatidylinositol 3-kinaseと結合してTGNに局在することを明らかにした。この蛋白質複合体はTGN・エンドソーム輸送とオートファゴソーム形成に必要な機能素子供給の両方を制御すると考えている。さらにApg5-Apg12複合体がオートファゴソーム前駆体に結合し、それをオートファゴソームへ成長させていることを発見した。またApg5がApg12と結合すると、LC3-Iが翻訳後修飾によりLC3-IIとなりオートファゴソーム膜に局在化することも見いだした。以上、エンドソームとオートファゴソームに関わる機能素子を同定しその機能に関する知見が得られた。
2)血小板放出反応:Streptolysin-Oにより形質膜を透過型にした血小板で、濃染顆粒に含まれるセロトニンとα顆粒に含まれるvon Willebrand因子の放出を測定する再構成系を確立した。それらの放出反応はATP・細胞質依存的であり、細胞質中に必須因子のひとつを同定し、解析中である。また、α顆粒の放出にRab4が必須な制御因子であることを明らかにした。さらに、透過型血小板の凝集アッセイを確立し、Rhoが重要な働きをすることを明らかにした。

Research Products

• [Publications] Kirisako T, et al.: "The reversible modification regulates the membrane-binding state of Apg8/Aut7 essential for autophagy and the cytoplasm to vacuole targetting pathway"J.Cell Biol.. 151. 263-275 (2000)
• [Publications] Kabeya Y, et al.: "LC3, a mammalian homolog of yeast Apg8p, is localized in autophagosome membranes after processing"EMBO J.. 19. 5720-5728 (2000)
• [Publications] Shirakawa R., et al.: "Small GTPase Rab4 regulates Ca2+-induced a-granule secretion in platelets."J.Biol.Chem.. 275. 33844-33849 (2000)
• [Publications] Murayama T, et al.: "Overexpression of low density lipoprotein receptor eliminates apolipoprotein B100-containing lipoproteins from circulation and markedly prevents atherogenesisi in apolipoprotein E-deficient mice."Atherosclerosis. 153. 295-302 (2000)
• [Publications] Ozaki H., et al.: "Junctional adhesion molecule (JAM) is phosphorylated by protein kinase C upon platelet activation."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 276. 873-878 (2000)
• [Publications] Mizushima N, et al.: "Dissection of autophagosome formation using Apg5-deficient mouse embryonic stem cells"J.Cell Biol.. 152. 657-667 (2001)
• [Publications] Kihara A, et al.: "Beclin-phosphatidylinositol 3-kinase complex functions at the trans-Goligi network"EMBO reports. (in press). (2001)
• [Publications] Nishioka H., et al.: "Small GTPase Rho regulates thrombin-induced platelet aggregation."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 280. 970-975 (2001)
• [Publications] Lippe R, et al.: "Methods Enzymol."Expression, purification, and characterization of Rab5 effector complex, Rabaptin-5/Rabex-5.. 14 (2001)