2000 Fiscal Year Annual Research Report
家蚕ウィルスの機能解析による新たなベクター開発に関する研究
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10306006
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| Research Institution | Kyoto Institute of Technology |
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Principal Investigator |
松本 継男 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (40107355)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
前川 秀彰 国立感染症研究所, 放射能管理室, 室長 (60100096)
伴戸 久徳 北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20189731)
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| Keywords | Bm NPV / PxGV / PfDNV / 温度感受性変異株 / ie1プロモーター / レトロトランスポゾン / TPRT / 選択的スプライシング |
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| Research Abstract |
家蚕核多角体ウィルス(BmNPV)の機能解析とベクターとしての資質について,ウィルス温度感受性変異株の作出とその機能解析,ウィルスプロモーターの機能解析および抗原遺伝子の発現機作に関する研究を通じて検討した。
Bm NPVを突然変異誘発剤(Brdu)を用いて温度感受性(25゜,33℃)変異株を作出し,ヘリカーゼに欠損のある変異株とRNAポリメラーゼに欠損のある変異株を単離した。このウィルス複製とウィルスのパッケージングの組合せによるベクターとしての利用法を示した。またコナガ顆粒病ウィルス(PxGV)の全塩基配列を決定し,関連ウィルスのベクター利用のための基本的な情報を提供した。
外来遺伝子を効率良く発現させるために,Bm NPVのie1遺伝子のプロモーターについて検討し,初期に発現する遺伝子上に存在し,昆虫変態ホルモンで調節可能であること,またプロモーター活性も調節可能であることを発現した.またPfDNVのゲノム解析から,少量のゲノムサイズで効率良い情報発現の系を確立した。
さらにnon-LTR型のレトロトランスポゾンをゲノム挿入に必要なベクターと捉え,rDNAに特異的に存在するR2Bmを使って解析し,TPRTと宿主の修複機構による相同組換えによるゲノムへの挿入が可能であることを証明した。
以上の研究の組合せにより,効率良い導入系(ベクター)構築が可能となった。
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[Publications] M.SHIKATA: "Effect of nearing at non-permissive temperature on silkworm larvae infected with temperature-sensitive"Acta Virologica. 42. 285-292 (1998)
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[Publications] Y.HASHIMOTO: "Sequence Analysis of the Plutella xylostella Granulovirus Genome"Virology. 275. 358-372 (2000)
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[Publications] T.HAYAKAWA: "Patterns of Genome organization and content in lepidoptera Baculoviruses"Virology. 278. 1-12 (2000)
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[Publications] M.SHIKATA: "Isolation and characterization of a temperature-sensitive mutant of Bombyx mori nucleopolyhedrosis"J.gen.Virology. 79. 2071-2078 (1998)
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[Publications] Y.HASHIMOTO: "DNA sequence analysis Plutella xylostella granulovirus"RIKEN Review. (22). 63-66 (1999)
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[Publications] M.SAKIIRI: "Phenotypic characterization of ts mutant of the Bombyx mori (lepidoptera,Bombyeidae) nucleopoly hedrovirus"Appl.Entomol.Zool.. 34. 129-138 (1999)
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[Publications] Y.HASHIMOTO: "Physical map of a Plutellas tylostella granulovirus genome"Appl.Entomol.Zool.. 35. 45-51 (2000)
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[Publications] T.HAYAKAWA: "Analysis of protein encoded in the bipartite genome of a new type of parvo-like virus isolated from silkworm"Virus Res,. 66. 101-108 (2000)
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[Publications] 山岸潤也: "PfDNV遺伝子産物によるウィルスRNAスプライシングの抑制"日蚕雑. 69. 271-276 (2000)
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[Publications] J.YAMAGISHI: "Genome organization and mRNA structure of Periplaneta fuliginosa densovirus"Arch.Virol.. 144. 2111-2124 (1999)
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[Publications] K.OKANO: "A defective type of non-LTR retrotransposon, BMC1, is a useful candidate as a vector for gen"Appl.Entomol.Zool.. 33. 247-254 (1998)
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[Publications] Y.NAKAJIMA: "A novel tripartite structure comprising a Mariner like element and two additional retrotransposons"J.mol.evol.. 48. 577-585 (1999)
