1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10307024
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
須田 年生 熊本大学, 医学部, 教授 (60118453)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高倉 伸幸 熊本大学, 医学部, 助手 (80291954)
山口 直人 熊本大学, 医学部, 助教授 (00166620)
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| Keywords | Hemangioblast / 造血幹細胞 / 血管内皮細胞 / 造血支持組織 / 自己複製因子 / シグナルトラップ法 / AGM領域 / 細胞接着 |
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| Research Abstract |
本研究は、造血幹細胞の微小環境の分子基盤を、(1)造血の発生、(2)造血幹細胞の移動さらには(3)幹細胞移植の3点から明かにしようとするものである。本年度は、以下の項目を研究目的とした。造血幹細胞と血管内皮細胞の共通祖先細胞であるHemangioblastの同定を行い、幹細胞がいつ、どこで、血管内皮細胞とどのような関係により発生するかを明かにする。血管内皮細胞が造血支持組織として働いていると仮定して、造血支持分子を、シグナルトラップ法によりクローニングし、自己複製因子の同定をめざす。
1) 胎生9.5日マウスAGM領域の細胞から、Hemangioblastを含むと考えられる細胞分画(受容体型チロシンキナーゼTIE2陽性分画)をFACSを用いて分離し、ストロマ細胞上で培養し、造血細胞、血管内皮細胞の分化を観察することができた。この分画を細分画することにより、造血幹細胞と血管内皮細胞の共通祖先細胞Hemangioblastを同定した。
2) 蛍光蛋白質Green Fluorescent Protein(GFP)トランスジェニックマウスのAGMを用いて、移植実験を行い、in vivoにおける幹細胞からの分化を検討した。造血幹細胞分画から、血液細胞のみならず、血管内皮細胞の分化がみられることを確認した。
3) Angiopoietin-TIE2のシグナルにより幹細胞表面にインテグリンが発現し、細胞接着が亢進することを認めた、血管内皮細胞への接着は、幹細胞増殖にきわめて重要な細胞現象で、これに手がかりに、幹細胞の自己複製機構にアプローチできると考えられる。
4) シグナルトラップ法により、胎生9.5日マウス臍帯動脈の血管内皮細胞より新規遺伝子を4種クローニングした。これらの機能解析を進める予定である。
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[Publications] Takakura N: "Critical of the TIE2 endothelial cell receptor in the development of difinitive hematopoiesis." Immunity. 9. 677-686 (1998)
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[Publications] Hirao A: "Overexpression of c-terminal src kinase homologous kinase supresses activation of lyntyrosine kinase required for VLA5-mediated Dami cell spreading." J Biol Chem. 273. 10004-10010 (1998)
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[Publications] Sato A: " Characterization of TEK receptor tyrosine kinase and its ligands.Angiopoietins,in human hematopoietic progenitor cells." Inter Immunol. 10. 1217-1227 (1998)
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[Publications] Oike Y: "Failure of primitive hematopoiesis and vasculo-angiogenesis in mice lacking the transcriptional cofactor CBP." Blood. (in press). (1999)
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[Publications] Hamaguchi I: "In vito hematopoietic and endothelial cell development from cells expressing TEK receptor in murine AGM region." Blood. (in press). (1999)
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[Publications] TadaJ-i: "A common signaling pathway via SYK and Lvn tvrosine kinases generated from capping of the sialomucins CD34 and CD43 in immature hematopoietic cells." Blood. (in press). (1999)
