1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10307030
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Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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| Research Institution | National Research Institute for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
鈴木 盛一 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 部長 (00111386)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中嶋 啓雄 京都府立医科大学, 第2外科, 助手 (70275212)
四宮 貴久 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 室長 (30196414)
田村 明彦 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 研究員
木村 廣光 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 室長 (80115477)
絵野沢 伸 国立小児病院, 小児医療研究センター・実験外科生体工学部, 室長 (40232962)
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| Keywords | アポトーシス / Fash / アデノウィルスベクター / HVJ-リポゾーム / cre I lox P / 肝移植 / 遺伝子導入 / 免疫貴容 |
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| Research Abstract |
浸潤リンパ球にアポトーシスを誘導し拒絶反応から防御する目的でFasL遺伝子の導入を検討した。アデノウィルスを用いた検討ではEl領域にCAGプロモーターとその下流にFasLcDNAさらに下流にはポリAを挿入、かつCAGとFasLの間に両端にloxP配列を持つスタッファーを置いた(adloxP FasL)。スタッファーにはネオマイシン耐性遺伝子とポリAが存在している。したがって、adloxPFasLを導入してもFasLは発現しない。loxP配列を特異的に切断するCre酵素を発現するベクター(adCre)を共感染させることでスタッファ一遺伝子が除去され、FasLのmRNAへの転写が開始する。マウスにadloxPFasLとadCreを静脈内投与したところ、adCreの投与量依存的なFasL発現が肝で見られた。発現量を高めると2日以内に劇症肝炎により死亡した。ラットで劇症肝炎を起こさないadloxPFasLとadCreの投与を行い、3日目の肝を同種移植した。生存日数は著明に延長したが、永久生着は得られず、最長は32日であった。アデノウィルスにより肝細胞で多量のFas抗原が発現することが考えられた。そこで、ウィルスによらないHVJ-リポゾームによる遺伝子導入を行った。FasLcDNAを組み込んだプラスミドをリポゾーム膜に内包、周囲を不活性化したセンダイウイルスで覆ったものである。センダイウイルスの細胞融合能を利用して細胞膜とリポゾーム膜を融合させ、中のプラスミドを標的細胞内に移入する。経門脈投与により肝での遺伝子発現効率はl0〜20%であった。その肝を同種移植したところ、最大で42日間の生着延長が得られたが、やはり永久生着には至らなかった。FasLの発現量が十分でないと考えられた。今後は、肝炎を起こさずに十分なFasLを発現させ、拒絶反応を確実に抑制していく手技の開発をめざす。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Torayuki Okuyama et al: "Fas-mediated apoptosis is involved in the elimination of gene-transduced hepatocytes with E1/E3-deleted adenoviral vectors." J Gastroenterol Hepatol. 13. 113-118 (1998)
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[Publications] Yoshihiko Kageyama et al: "Apoptosis is involved in acute cardiac allograft rejection in rats." Ann Thor Surg. 65・6. 1604-1609 (1998)
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[Publications] Torayuki Okuyama et al: "Efficient Fas-ligand gene expression in rodent liver after intravenous injection of a recombinant adenovirus by the use of a Cre-mediated switching system." Gene Therapy. 5. 1047-1053 (1998)
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[Publications] C.Shimizu et al: "A novel immunosuppressant,FTY720,increases the efficiency of a Superantigen-induced peripheral T cell deletion whilst inhibiting negative selection in the thymus." Immunology. 94・4. 503-512 (1998)
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[Publications] J.-D.Wang et al: "Lymphotactin: a key regulator of lymphocyte trafficking during acute graft rejection." Immunology. 95・1. 56-61 (1998)
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[Publications] Xiao-Kang Li et al: "Prolonged survival of rat liver allografts transfected with Fas-ligand expressing plasmid." Transplantation. 66・11. 1416-1423 (1998)
