乳酸菌による新規バクテリオシンの生産とその食品保存料への展開

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10450311
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 塩谷 捨明 大阪大学, 大学院・工学研究科, 教授 (50026259)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 内山 圭司 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助手 (60294039) ; 清水 浩 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (00226250)
• Keywords: エンテロシンA / バクテリオシン / シャトルベクター / E.faecium / バクテリオシン耐性遺伝子

Research Abstract

糠床より、Lactob acillus sake JCM1157株に対する抗菌活性を示す乳酸菌Enterococcus faecium N15株を分離した。N15株が生産するバクテリオシンの抗菌スペクトルを調べたところ、食品汚染の原因となるListeria monocytogenesに対しても抗菌活性を示すことが明らかとなった。さらに、このバクテリオシンの特性を解析したところ、class IIaバクテリオシンに属することが示唆されたので、class IIaバクテリオシン、その生合成に関与するヒスチジンキナーゼ、および、誘導因子に保存されているアミノ酸配列を基にPCRプライマーを合成し、バクテリオシン生合成系遺伝子の取得を行った。この結果、本バクテリオシンはエンテロシンA(EntA)であることが明らかとなり、また、バクテリオシン耐性遺伝子も取得することができた。
E.faecium N15は、少なくとも3つのプラスミドを有しており、この中で最小のプラスミドpEFNP1の全塩基配列を決定した。pEFNP1、pUC19、エリスロマイシン(Em)耐性遺伝子を融合したベクターpKU203を構築した。pKU203は、大腸菌およびE.faecium N15株で維持されることが明らかとなり、大腸菌-乳酸菌間のシャトルベクターを構築することができた。次いで、pKU203にバクテリオシン耐性遺伝子を導入したプラスミドベクターpKU204を構築した。pKU204もN15株で維持され、さらに、異種菌株E.faecalis JCM8726でも維持されることが明らかとなった。そのうえ、バクテリオシン感受性菌株であるJCM8726株に対し、バクテリオシン耐性能を付与することも確認され、Emに代わりEntAを選択圧として用いてもベクターは維持されることが明らかとなった。