1998 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
10460040
|
|---|
| Research Institution | Kyoto University |
|---|
Principal Investigator |
清水 昌 京都大学, 農学研究科, 教授 (70093250)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小川 順 京都大学, 農学研究科, 助手 (70281102)
片岡 道彦 京都大学, 農学研究科, 助手 (90252494)
|
|---|
| Keywords | polyunsaturated fatty acid / arachidonic acid / γ-linolenic acid / desaturase / desaturase-mutant / Mortierella alpina |
|---|
| Research Abstract |
酵母とラットから既にクローン化されている脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子の一時構造で相同性が高い二カ所に基づいてセンスおよびアンチセンス合成オリゴヌクレオチドプライマーを作製し、Mortierella alpina 1S-4のゲノムコスミドライブラリーに対しPCRを行った。得られた増幅DNA断片の塩基配列を決定したところ、既知の脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子と相同性を示したことから、次に、本DNA断片をプローブとして用い、本酵素ゲノム遺伝子のクローニングを試みた。得られたポジティブグローンの塩基配列を決定した結果、本遺伝子は既知の脂肪酸Δ9不飽和化酵素遺伝子と相同性を有することが判明した。
既に報告のある高等植物と線虫のΔ6不飽和化酵素のアミノ酸配列の情報を基にオリゴヌクレオチドプライマーをデザインし、Mortierella alpina 1S-4の染色体DNAを鋳型としたPCRによりプローブを得た。このプローブを用いMortierella alpina 1S-4のcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、Δ6不飽和化酵素をコードするcDNAを微生物から初めて取得した。推定アミノ酸配列は高等植物、線虫のΔ6不飽和化酵素とそれぞれ30.5%、34.2%の相同性を示した。Mortierella alpina 1S-4のΔ9不飽和化酵素がC末端側にシトクロームb_5モチーフを持つのに対し、本酵素はN末端側に本モチーフが認められた。本cDNAを麹菌に導入した形質転換株では、コントロールには存在しないガンマリノレン酸が全脂肪酸あたり25.2%蓄積し、天然では珍しいガンマリノレン酸含有微生物へと形質転換することに成功した。
|
-
[Publications] H.Kawashima et al.: "Production of 8,11,14,17-cis-Eicosatetraenoic Acid (20:4ω3) by a Δ5 and Δ12 Desaturase-Defective Mutant of an Arachidonic Acid-Producing Fungus Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1495-1500 (1998)
-
[Publications] K.Higashiyama et al.: "Effects of Mineral Addition on the Growth Morphology of and Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(12). 1815-1819 (1998)
-
[Publications] M.Certik et al.: "Progress in Polyunsaturated Fatty Acid Production by Fungi" Recent Res.Devel.in Oil Chem.2. 89-103 (1998)
-
[Publications] M.Certik et al: "Desaturase-defective Fungal Mutants: Useful Tools for the Regulation and Overproduction of Polyunsaturated Fatty Acids" Trends Biotechnol.16(12). 500-505 (1998)
-
[Publications] K.Higashiyama et al.: "Enhancement of Arachidonic Acid Production by Mortierella alpina 1S-4" J.Am.Oil Chem.Soc.75(11). 1501-1505 (1998)
-
[Publications] N.Shirasaka et al.: "Microbial Conversion of Palmiteleic Acid to 9,12-Hexadecadienoic Acid (16:2ω4) by Irichodorma sp.AM076" J.Am.Oil Chem.Soc.75(6). 717-720 (1998)
-
[Publications] 清水 昌: "ゴマその1科学と機能性/ゴマリグナンと微生物・脂肪酸代謝制御" 丸善プラネット,東序, 41-51 (1998)
