非メバロン酸経路の解明を中心とする放線菌の生産するテルペン化合物の生合成研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10460047
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 瀬戸 治男 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 教授 (10013335)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 葛山 智久 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (30280952) ; 新家 一男 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (20251481) ; 早川 洋一 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助教授 (20208606) ; 降旗 一夫 東京大学, 大学院・農学生命科学専攻, 助手 (20219091) ; 降旗 桂子 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 教務職員
• Keywords: 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase / 非メバロン酸経路 / 2-C-methyl-D-erythriitol 4-phosphate / 4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol / 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase / 4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinase / 2-phospho-4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol / 2-C-methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate

Research Abstract

1.非メバロン酸経路とメバロン酸経路の両方を有する放線菌Streptomyces sp.CL190から、テルペン生合成の鍵酵素である3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductaseを原核生物からはじめて精製した。
2.また、本菌から1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthaseを精製し、その酵素的性質を明らかにした。
3.昨年度に報告した1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomeraseをコードする遺伝子yaeMの破壊株を大腸菌で作成し、この遺伝子がこの酵素をコードしていることを確認した。
4.3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductaseをコードする遺伝子を、別のテルペン化合物生産菌からクローニングした。
5.非メバロン酸経路の生合成中間体である2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphateから、4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritolが新規酵素2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferaseによって生成されることを証明した。
6.上記4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritolが、4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol kinaseによってその2-リン酸化体に変換されることを証明した。
7.次の非メバロン酸経路の反応段階が、上記2-リン酸化体の2-C-methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphateへの変換であることを証明した。

Research Products

• [Publications] S.Takahashi,T.Kuzuyama and H.Seto: "Purification,characterization,and cloning of a eubacterial 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,a key enzyme involved in the biosynthesis of terpenoids"J.Bacteriol.. 181. 1256-1263 (1999)
• [Publications] T.Kuzuyama.S.Takahashi,and H.Seto: "Construction and characterization of Escherichia coli disruptants defective in the yaeM gene"Biosci.Biotech.Biochem.. 63. 776-778 (1999)
• [Publications] H.Seto and T.Kuzuyama: "Bioactive natural products with carbon-phosphorus bonds and their biosynthesis"Nat.Prod.Rep.. 16. 589-596 (1999)
• [Publications] T.Dairi,Y.Motohira,N.Itoh,T.Kuzuyama,S.Takahashi,and H.Seto: "Cloning of the genes encoding 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reducuctase from terpenoid antibiotics-producing Streptomyces strains"Mol.Gen.Genet.. 262. 957-964 (2000)
• [Publications] T.Kuzuyama,M.Takagi,K.Kaneda.T.Dairi and H.Seto: "Formation of 4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol from 2-C-methyl-D-erythrinol 4-phosphate by 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase,a new enzyme in the nonmevalonate pathway"Tetrahedron Lett.. 41. 703-706 (2000)
• [Publications] T.Kuzuyama,M.Takagi,S.Takahashi and H.Seto: "Cloning and characterization of 1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase from Streptomyces sp.strain CL190 that uses both the mevalonate and nonmevalonate pathways for isopentenyl dephosphate biosynthesis"J.Bacteriology. 182. 891-897 (2000)
• [Publications] T.Kuzuyama,M.Takagi,K.Kanada,H.Watanabe,T.Dairi and H.Seto: "Studies on the nonmevalonate pathway : Formation of 2-C-methyl-C-erythritol 2,4-cyclodiphospate from 2-phospho-4-(cytidine 5'-diphospho)-2-C-methyl-D-erythritol"Tetrahedron Lett.. 41(accepted for publication).