インフルエンザウイルスNS1,NS2蛋白のウイルス工学的,細胞生物学的研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10470075
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 榎並 正芳 金沢大学, 医学部, 助教授 (30168794)
• Keywords: インフルエンザウイルス / NS1 / NS2 / ウイルスベクター / ワクチン

Research Abstract

(目的)インフルエンザウイルスのNS遺伝子組換えウイルスを利用して、1)ウイルスの病原性を規定する因子を明らかにする、2)NS1,NS2蛋白の機能解析を行う。3)種々の抗原を発現するウイルスを迅速に作成する系を開発する。培養細胞レベルと実験動物レベルで、ウイルス複製と遺伝子発現、病理学的、免疫学的解析を行う。
(方法)インフルエンザウイルスA型の遺伝子組換えはRNaseH法(Enami ＆ Enami,2000)を用いた。NS2ACATウイルスのNSゲノムは、NS1のN端側151残基の下流に自己切断活性を持つ17残基の2Aプロテアーゼ配列を挟んでCAT遺伝子を挿入した。
(結果)NS2ACATウイルスは、感染の初期過程は正常で、後期蛋白の発現とウイルス粒子形性が抑制され、温度感受性となり、マウスに対して高度に弱毒化された。培養細胞レベルではNS1とCATの融合蛋白を発現した後、その20%は直ちに自己切断され成熟型蛋白となった。NS2蛋白の発現は野生株の20%程度であった。感染24時間後には発現CAT蛋白の50%が培養上精中に検出された。マウス肺ではウイルスの僅かな複製とCATの発現が確認され、血中IgG抗体価の僅かな上昇が見られた。当該ウイルス感染マウスは、致死量のWSNウイルス感染に対し完全に感染防御がみられた。マウスから分離したTリンパ球と精製CAT蛋白を用いたin vitroの解析では、γインターフェロンの誘導、CTL活性が確認された。
(考察)当該ウイルスの弱毒化の機構は、ウイルス粒子形成の抑制による。今後は、NS1と相互作用する宿主因子の解析を行う必要がある。

Research Products

• [Publications] Masayoshi Enami: "Characterization of influenza virus NS1 protein by using a novel helper-virus-free reverse genetic system"Journal of Virology. 74. 5556-5561 (2000)
• [Publications] 榎並正芳: "インフルエンザウイルスのリバースジェネティクス"Medical Briefs in Virus Infection. 13. 12-13 (2000)