ヒトロタウイルス人工粒子を利用した各ウイルス蛋白の構造と機能に関する研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10470080
• Research Institution: Fujita Health University
• Principal Investigator: 谷口 孝喜 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40094213)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武田 直和 国立感染症研究所, ウイルスII部, 室長 (90132894) ; 小林 宣道 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (80186759) ; 浦沢 价子 札幌医科大学, 保健医療学部, 教授 (90045378) ; 松浦 善治 国立感染症研究所, ウイルスII部, 室長 (50157252)
• Keywords: ロタウイルス / バキュロウイルス / 感染防御 / ワクチン / 人工空粒子 / 構造蛋白 / RNAセグメント / リバースジェネテックス

Research Abstract

1)VP2とVP6あるいはVP2,VP6,VP7の共発現で自己集合した精製人工空一重殻粒子および人口空二重殻粒子を大量に得、まず、VP2/VP6人工空一重殻粒子を用いて、マウスにおける粘膜免疫の効果を検討した。VP2/VP6のみの経鼻接種では免疫原性がきわめて弱いが、大腸菌易熱性トキシン(LT)由来およびコレラトキシン(CT)由来の各種変異粘膜アジュバント、特に変異型135、変異型H44A、リコンビナントLT-Bサブユニットの併用では、血清中および便中のIgG、IgA応答が顕著に高かった。しかし、LT-E122K,CT-E122Kの効果は低かった。免疫後、マウス強毒株(EW)を経口投与し防御能を検討したところ、変異型135,変異型H44Aの併用では、便中ウイルス量の激減を観察した。こうして、人工空粒子を免疫原とした場合、毒性のきわめて低い変異型LTの有用性(免疫原性とともに防御能)を示した点は、今後の本アジュバントのヒトへの応用の可能性を示した点で意義がある。
2)ロタウイルスのリバースジェネテックスの系の確立をめざし、以下の実験を行った。、増殖能の低く、トリプシン依存性が高いヒトロタウイルスKU株をヘルパーウイルスとして用い、増殖能の高く、トリプシン依存性が低いSA11-L2のVP4,VP7遺伝子をMA-104細胞に導入した。さらに、ワクチニアウイルスDIE株由来で、ニワトリ胎児細胞ではCPEを起こすが他の動物細胞には起こさないDIs株にT7ポリメラーゼを導入したDIs-T7を利用し、DIs-T7とT7プロモーター-ロタウイルスVP4あるいはVP7cDNA-D型肝炎リボザイム-T7ターミネーターのプラスミドを調整し、細胞内に導入し、KU株を感染させ、KU-VP7あるいはKU-VP4特異的中和単クロン抗体存在下でスクリーニングする系をほぼ確立した。

Research Products

• [Publications] J. Okada et al.: "New P serotype of group A human rotavirus closely related to that of a porcine rotavirus"J. Med. Virol.. 60. 63-69 (2000)
• [Publications] C. Zao. et al.: "Sequence analysis of VP1 and VP7 genes suggests occurrence of a reassortant of G2 rotavirus responsible for an epidemic of gastroenteritis"J. Gen. Virol.. 80. 1407-1415 (1999)
• [Publications] J. Okada et al.: "Functional analysis of the heterologous NSP1 genes in the genetic background of simian rotavirus SA11"Arch. Virol.. 144. 1439-1449 (1999)
• [Publications] J. Okada et al.: "Analysis on reassortment of rotavirus NSP1 genes lacking coding region for cysteinerich zinc finger motif."Arch. Virol.. 144. 345-353 (1999)
• [Publications] M.U. Ahmed et al.: "Analysis of human rotavirus G serotype in Bangladesh by enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction"J. Diarrheal Dis. res.. 17(1). 22-27 (1999)
• [Publications] N. Kobayashi et al.: "Sequence analysis of structural and non-structural proteins of a human group B rotavirus detected in Calcutta,India"J. Clin. Microbiol.. (in press).