肝内および肝外転移を有する進行肝細胞癌に対する遺伝子治療法の確立

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10470132
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 金子 周一 金沢大学, 医学部, 助教授 (60185923)
• Keywords: 遺伝子治療 / 肝癌 / アルファフェトプロテイン / アデノウイルス

Research Abstract

肝内および肝外転移を有する進行肝細胞癌に対する遺伝子治療法を確立するため、Transcriptional targetingを利用した新たなべクターの開発を検討した。肝癌に特異的に発現しているalfa-fetoprotein(AFP)のプロモーター領域を改変し、肝癌細胞における発現および移植肝癌における発現を検討した。また治療遺伝子として自殺遺伝子であるherpes simplex virus thymidine kinase遺伝子を用いて担癌マウスにおける抗腫瘍効果を検討した。
これらの実験ではtranscriptional tartgetingによる効果が示されたもののAFPプロモーター活性が弱く十分な治療遺伝子を発現することが出来なかった。そこでCre-loxPシステムを用いて、肝癌に特異的で強力に発現するベクターを作製した。これによって培養細胞およびマウス腫傷において高い遺伝子発現が得られ、とりわけ肝内および肝外の転移病巣においても十分な発現が得られた。
しかしこのCre-loxPの系では2種類のウイルスベが同時に感染する必要があり、十分な発現のためにはMOI 25以上の力価を要することも示された。こうしたことから投与ベクター量が大量となるため、アデノウイルス投与では問題が生じること示唆され、今後の問題点とされた。
これに対し、さらにHVJリポソ一ムといった安全性の高いベクターを用いた検討を行いて検討したところ、複数回のべクター投与によって肝内に転移した肝癌を治療することが可能であった。このようにAFP遺伝子を用いたtranscriptional targetingによって肝内および肝外に転移した進行肝癌の治療が可能であることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Reiko Saeki: "Intratumoral genomic heterogeneity in human hepatocellular carcinoma detected by restriction landmark genomic scanning"Journal of Hepatology. (in press).
• [Publications] Taro Yamashita: "Comprehensive gene expression profile of a normal human liver"Biochemical and Biophysical Research Communication. in press.
• [Publications] Masao Honda: "Cell cycle regulation of hepatitis C virus IRES-directed translation"Gastroenterology. 118. 152-162 (2000)
• [Publications] Aki Takeuchi: "Interferon-alpha modulates resistance to cisplatin in three human hepatoma cell lines"Journal of Gastroenterology. 34. 351-358 (1999)
• [Publications] Katsuro Koike: "Survey of hepatitis B virus co-infection in hepatitis C virus infected patients suffering from chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma in Japan"Japanese Journal of Cancer Research. 90. 1270-1272 (1999)
• [Publications] Miyoko Natsume: "Attenuated liver fibrosis and depressed serum albumin levels in carbon tetrachloride-treated IL-6-deficient mice"Journal of Leukocyte Biology. 66. 601-608 (1999)
• [Publications] Eishiro Mizukoshi: "Serum level of soluble interferon alpha/beta receptor as an inhibitory factor of IFN in the patients with chronic hepatitis C"Hepatology. 30. 1325-1331 (1999)
• [Publications] Akito Sakai: "Quasispecies of hepatitis C virus in serum and in three different parts of the liver of patients with chronic hepatitis"Hepatology. 30. 556-561 (1999)
• [Publications] Yasunari Nakamoto: "Inhibition of peripheral blood lymphocyte apoptosis by soluble Fas ligand in patients with hepatocellular carcinoma"Oncology Report. 6. 733-739 (1999)
• [Publications] Eishiro Mizukoshi: "Up-regulation of Type I interferon receptor by interferon-gamma"Journal of Interferon and Cytokine Research. 19. 1019-1023 (1999)
• [Publications] Takayoshi Koura: "Investigation of albumin-synthesizing ability in rat cirrhotic liver-directed hepatocytes using primary hepatocyte culture"Journal of Hepatology. 31. 293-299 (1999)
• [Publications] Hideki Ohono: "Human hepatitis B virus X protein augments the DNA binding of NF-IL6 through its basic-leucine zipper domain"Journal of Medical Virology. 58. 11-18 (1999)
• [Publications] Shuichi Kaneko: "In Nagy Habid (eds): "Methods in Molecular Medicine""Gene therapy vectors harvoring AFP regulatory sequences : preparation of an adenoviral vector (in press).
• [Publications] Shuichi Kaneko: "In Sudhir Srivastava (eds): "Molecular Pathology of Early Cancer""Liver Cancer. 9 (1999)