1999 Fiscal Year Annual Research Report
CCK-A受容体トランスジェニックラットの作製(OLETFラットへの導入)
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10470144
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| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
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Principal Investigator |
大槻 眞 産業医科大学, 医学部, 教授 (00030916)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木原 康之 産業医科大学, 医学部, 助手 (80279330)
中村 早人 産業医科大学, 医学部, 助手 (90207902)
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| Keywords | CCK-A受容体 / トランスジェニック / OLETFラット |
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| Research Abstract |
平成10年度には、OLETFラットのCCK-A受容体は遺伝子レベルの異常であり、CCK-A受容体を介する機能は完全に消失していたことを確認して報告した(J Gastroenterol 33:702-709;1998)。
平成11年度には、そのCCK-A受容体の機能を回復するために当初の計画どおりCCK-A受容体トランスジェニックラットの作製に取りかかった。CCK-A受容体をコードする全体のcDNAが必要であるためにRT-PCR法を用いた。ラット脾臓からRNAを抽出して逆転写酵素を使用した後、CCK-A受容体mRNAの全域が得られるように設計したプライマーを用いて約1.4kbのcDNAが得られ、TAクローニングを行った。CCK-A受容体cDNAのみではトランスジェニック後にgenomicDNAに組み込まれても発現がみられないので、CCK-A受容体cDNAの5'側にプロモーター領域をもつようにプラスミドの入れ替えを行った。
CCK-A受容体の発現をより強力にするためには、このプロモーター領域が重要であるため、サイトメガロウイルスのプロモーター領域をもつpcDNA3.1プラスミドとSV40のエンハンサーおよびプロモーター領域をもつpSIプラスミドの2種類のプラスミドにCCK-A受容体cDNAを入れ替えた。それぞれのプロモーター領域とCCK-A受容体をコードする領域、ポリ(A)領域が含まれるように2種類の注入DNAを精製した。
来年度は実際にマイクロインジェクション法をもちいてトランスジェニックラットを作製する予定である。
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[Publications] Hayato Nakamura et al: "Defects of cholecystokinin(CCK)-A receptor gene expression and CCK-A receptor-mediated biological functions in Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty(OLETF)rats"J Gastroenterol. 33. 702-709 (1998)
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[Publications] 木原康之ら: "OLETFラットにおける膵線維化機序の検討"OLETFラット研究会記録集. 第4巻. 19-22 (1998)
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[Publications] Makoto Otsuki et al.: "Alterations in pancreatic exocrine functions in OLETF rats."Elsevier Obesity and NIDDM Lessons the OLETF rat. 171-181 (1999)
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[Publications] Makoto Otsuki et al.: "CCK and CCK-A receptors in the control of feeding behavior."Elsevier Control mechanisms of stress and emotion:Neuroendocrine-based studies. 141-154 (1999)
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[Publications] Makoto Otsuki et al.: "Metabolic abnormalities in the genetically obese and diabetic Otsuka Long-evans Tokushima Fatty Rat can be prevented and reserved by α-glucosidase inhibitor."Metaborism. 48(3). 347-354 (1999)
