気道におけるセリン蛋白分解酵素阻害物質リダンダンシィと特異的生理の解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10470150
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 貫和 敏博 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (40129036)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮崎 純一 大阪大学, 医学部, 教授 (10200156) ; 海老名 雅仁 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (10280885) ; 阿部 達也 東北大学, 加齢医学研究所, 講師 (70222651)
• Keywords: 蛋白分解酵素阻害物質 / SLPI / elafin / targeting / 気道防御

Research Abstract

本研究は、気道防御機構に関与する蛋白分解酵素阻害物質に着目し、気道に重複し、共通する多重シスチンのS-S架橋構造を持つ2種の阻害物質secretor leukoprotase inhibitor(SLPI)とelafinの生理的意義が、redundancyの重複機構か、あるいは特異生理作用かを検討し、気道防御機構の一端解明を目的とする。
(1) SLPI遺伝子:染色体位置、遺伝子発現及びノックアウトマウス作製
a) マウスSLPI遺伝子の染色体位置と遺伝子発現
先にクローニングしたマウスSLIP cDNAを用い、その染色体遺伝子座を2Hと決定し、これがヒト20q12-13.2に相当することを同定した(Am J Respir Cell Mol Biol,19,875-80,1998)。一方、in situ hybridizationにより肺炎マウスで経時的に気道上皮細胞にSLPI発現増強を認め、肺胞腔内単核白血球にも強発現をみた。牌臓ではgeminal centerの細胞に発現をみた(Am J Respir Crit Care Med,159,suppl,1999)。
b) SLPItargeting vectorの構築
マウスSLPI遺伝子の上流3kbから下流5kbの制限酵素地図を基に、SLPI全エクソンを除きPGKNEO(positive select)及びDTA(negative select)を含むtargeting constructを完成した。尚、当初予定したCre-loxP構築は後に回し、先にconventinal knockoutを試みる。近日中にES細胞に導入予定である。
(2) マウスelafin cDNAクローニング
マウス肺由来cDNA libraryを用い、ヒトとプタelafincDNAの高ホモロジー領域のdegenerative primerでnestedPCR等を繰り返したが、シグナルがなく、今後皮膚やkeratinocyte cDNA libraryよりマウスelafincDNAのクローニングを続行する。

Research Products

• [Publications] T.Suzuki,et.al.: "Bilateral pneumothoraces with multiple bullae in a patient with asymptomatic bronchiolitis obliterans 10 years ofter bone marrow transplantation" Bone Marrow Transplantation. 23(in press). (1999)
• [Publications] K.Narumi,et.al.: "Inhibition of Expermental Metastasis of Human Fibrosarcoma Cells by Anti-recombinant 37-kDa Laminin Binding Protein Antibody" Japanese Journal of Cancer Research. 90・4(in press). (1999)
• [Publications] Y.Saijo: "Autologous high-killing cytotoxict lymphocytes against human lung cancer and indaced using IL-1B,IL-2,IL-4 and IL-6" Clinical Cancer Research. (in press). (1999)