1998 Fiscal Year Annual Research Report
アンチフェクションによる標的細胞特異的遺伝子導入と異常細胞クローンの増殖制御
Project/Area Number |
10470173
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
土屋 滋 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (30124605)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
峯岸 正好 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (20211592)
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Keywords | WASP遺伝子野性型 / WASP遺伝子変異型 / GFP融合蛋白 / フローサイトメーター |
Research Abstract |
1. 今年度ばWASP遺伝子全長cDNA(野性型)をもとに、以下の変異体を作製した。 1)WASP△PH(PHドメイン欠失変異型、アミノ酸番号1-136を欠失) 2)WASP△GBD(GTPase結合ドメイン欠失変異型、アミノ酸番号146-265を欠失) 3)WASP△Pro(プロリンリッチドメイン欠失変異型、アミノ酸番号266-416を欠失) 4)WASP△C(C端のアクチン結合ドメインを含む領域欠失変異型、アミノ酸番号420-502を欠失) 2. 野生型および変異型についてGFP融合蛋白質として発現させるために、pEGFP-C1に組み込んだ各プラスミドをCOS-7に導入し、抗WASP抗体及び抗GFP抗体を用いたウェスタンブロット法により、各蛋白質の発現を確認した。pEGFP-C1ベクター を用いる利点は、導入遺伝子の発現を緑色蛍光を目安にして、フローサイトメーターで検出可能な点である。 3. 以上の変異型WASP遺伝子系を用いて、我々の作製した抗WASP単クローン抗体が、WASPの137-266アミノ酸を認識していることを明らかにした。 4. フローサイトメーターによる細胞内GFPの検出系を確立した。
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[Publications] Futatani T et al.: "Deficient expression of Bruton's tyrosine kinase in monocytes from X-linked agammaglobulinemia as evaluated by flowcytometric analysis" Blood. 91. 595-602 (1998)
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[Publications] Sasahara Y et al: "Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disorder after unrelated bone marrow transplantation in a young child with Wiskott-Aldrich syndrome" Pediatric Hematology and Oncology. 15. 347-352 (1998)
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[Publications] Kumaki S et al.: "Prolonged secretion of IL-15 in patients with severe forms of graft-versus-host disease after allogeneic bone marrow transplantation in children" International J Hematology. 67. 307-312 (1998)
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[Publications] Hossain A et al: "The Ah receptor is not involved in 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated apoptosis in human leukemic T cell lines" J of Biological Chemistry. 273. 19853-19858 (1998)
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[Publications] Imaizumi M et al: "Mutation in the E-domain of RAR α portion of the PML/RAR α chimeric gene may confer clinical resistance to all-trans retinoic acid in APL" Blood. 92. 347-382 (1998)
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[Publications] Kumaki S et al: "Functional role of interleukin-4(IL-4)and IL-7 in the development of X-linked severe combined immunodeficiency" Blood. 93. 607-612 (1999)