2000 Fiscal Year Annual Research Report
表皮細胞の発生・分化におけるPOUドメイン転写因子の役割
Project/Area Number |
10470185
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Research Institution | Hirosaki University |
Principal Investigator |
玉井 克人 弘前大学, 医学部, 助教授 (20236730)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今 淳 弘前大学, 医学部・附属病院, 講師 (60271798)
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Keywords | ケラチノサイト / POUドメインファクター / skn-1a / NLS |
Research Abstract |
1)表皮性POU domain factorであるskn-1aのcDNAおよびgenomic DNAのクローニング:cDNAをクローニングし、5'-RACEにてcDNAの5'末端を決定した。さらに、skn-1a cDNAの5'領域に相当するgenomic DNAをクローニングし、そのイントロン・エクソン構造を明らかにした。その結果、ケラチノサイトに発現する、これまで報告のないskn-1a splice-variantの存在を明らかにした。 2)skn-1aの表皮分化誘導機構、特に表皮細胞シグナル伝達と核内転写調節との関係に関する検討:skn-1aに同定したnuclear locarization signal(NLS)と予想される領域のアミノ酸をGFPに接続した融合蛋白の発現ベクターを作成し、培養表皮細胞に導入して核移行を確認するとともに、NLS近傍のセリン・スレオニンのリン酸化・脱リン酸化が核移行に関与するか否かをsite-directed mutagenesisによりこれらアミノ酸をアラニンに置換することにより確認した。その結果、NLSと予想したアミノ酸が核移行シグナルとして機能すること、そのC末端側に位置するセリン、スレオニンのリン酸化・脱リン酸化がNLSの機能を制御していること、このリン酸化・脱リン酸化は表皮細胞の分化により変化すること、等が明らかとなった。
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