1998 Fiscal Year Annual Research Report

抗酸化酵素過剰発現db/dbマウスを用いた膵ブドウ糖毒性分子機構の解析

Research Project

Project/Area Number	10470231
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	山崎義光大阪大学, 医学部, 助手 (40201834)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	松久宗英大阪大学, 医学部・附属病院, 医員梶本佳孝大阪大学, 医学部, 助手 (60301256)
Keywords	糖尿病 / 抗酸化酵素 / トランスジェニックマウス / ブドウ糖毒性 / インスリン非依存型糖尿病 / 転写因子
Research Abstract	NIDDMモデルマウスの膵β細胞に、抗酸化酵素の一つであるglutathione peroxidase(GSHPx.)を強制発現させることにより、β細胞glucose toxicityにおける酸化ストレスの意義を明らかとすべく実験を進めている。膵β細胞への選択的発現は、GSHPxのcoding sequenceをinsulin promoterの下流に組み込んだplasmidを作成することにより実施している。既に、現在までにC57BL/Ksマウスの受精卵約200個にDNAをinjectし、十数匹の出生を見た。そのうち、3匹のF0においてDNAレベルでの遺伝子組み込みが確認された。あいにく、accidentにより、うち2匹が死亡し、現在、一系統のみでF0およびF1が得られるに至っている。近く、マウスの数が増えるのを待って、膵組織染色にてGSHPxの発現を解析する予定である。抗GSHPx抗体は、transgene由来(ヒト)のGSHPxに加えて、マウス内因性のGSHPxをも認識する。従って、外来性GSHPx(transgene)が膵β細胞において発現していることは、一つは発現量の差により、そしてもう一つは、mRNAのnon-coding leader sequenceが内因性のGSHPXと異なることを利用し、RT-PCRを行うことにより確認する。また、同時進行でtransgenicマウスにはC57BL/Ks db/-マウスとの交配により既にdb遺伝子を付加しつつあり、膵でのtransgene発現が確認され次第、糖尿病発症に与える影響の検討を始めることが可能となっている。経時的に、糖負荷テスト、islet mass測定、免疫組織染色(Insulin,Glucagon,Glucokinase,PDX-1,NeuroD,Oct-1)、competitive RT-PCRによる単離膵島内mRNA量測定(insulin,Glucagon,GLUT2,Glucokinase,PDX-1,NeuroD,β-actin)を行う予定である。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Matsuhisa M,et al: "Prior Muscular Contraction Enhances Disposal of Glucose Analog in the Liver and Muscle." Metabolism. 47 1. 44-49 (1998)
[Publications] Miyazawa N,et al: "Immunological detection of fructated proteins in vitro and in vivo." Biochem.J.336. 101-107 (1998)
[Publications] Kajimoto Y,et al: "Suppression of transcription factor PDX-1/IPF1/STF-1/IDX-1 causes no decrease in insulin mRNA in MIN6 cells." J.Clin.Invest.100 7. 1840-1846 (1997)
[Publications] Matsuoka T,et al: "Glycation-dependent,reactive oxygen species-mediated suppression of the insulin gene promoter activity in HIT cells." J.Clin.Invest.99 1. 144-150 (1997)
[Publications] Kishimoto M,et al: "Sensitive,selective gas chromatographic-mass spectrometric analysis with trifluoroacetyl derivatives and a stable isotope for studying tissue sorbitol -priodoping activity." J.Chromatogr.Biomed.668. 1-10 (1997)
[Publications] Kaneto H,et al: "Expression of HB-EGF-like during pancreas development : a potential role of PDX-1 in the transcriptional activati" J.Biol.Chem.272 46. 29137-29143 (1997)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

抗酸化酵素過剰発現db/dbマウスを用いた膵ブドウ糖毒性分子機構の解析

Principal Investigator

山崎 義光 大阪大学, 医学部, 助手 (40201834)

Research Products

[Publications] Matsuhisa M,et al: "Prior Muscular Contraction Enhances Disposal of Glucose Analog in the Liver and Muscle." Metabolism. 47 1. 44-49 (1998)

[Publications] Miyazawa N,et al: "Immunological detection of fructated proteins in vitro and in vivo." Biochem.J.336. 101-107 (1998)

[Publications] Kajimoto Y,et al: "Suppression of transcription factor PDX-1/IPF1/STF-1/IDX-1 causes no decrease in insulin mRNA in MIN6 cells." J.Clin.Invest.100 7. 1840-1846 (1997)

[Publications] Matsuoka T,et al: "Glycation-dependent,reactive oxygen species-mediated suppression of the insulin gene promoter activity in HIT cells." J.Clin.Invest.99 1. 144-150 (1997)

[Publications] Kishimoto M,et al: "Sensitive,selective gas chromatographic-mass spectrometric analysis with trifluoroacetyl derivatives and a stable isotope for studying tissue sorbitol -priodoping activity." J.Chromatogr.Biomed.668. 1-10 (1997)

[Publications] Kaneto H,et al: "Expression of HB-EGF-like during pancreas development : a potential role of PDX-1 in the transcriptional activati" J.Biol.Chem.272 46. 29137-29143 (1997)

山崎義光大阪大学, 医学部, 助手 (40201834)