1998 Fiscal Year Annual Research Report

インテリジェント・ターゲッティングシステムを用いた難治性癌に対する遺伝子治療

Research Project

Project/Area Number	10470254
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	柳衛宏宣東京大学, 医科学研究所, 助手 (30212278)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	村田敬重日本油脂株式会社, 筑波研究所, 所長丸山一雄帝京大学, 薬学部, 助教授 (30130040) 佐藤智典東京工業大学, 生命理工学部, 助教授 (00162454) 谷憲三朗東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00183864)
Keywords	ドラッグデリバリーシステム / 非ウイルスベクター / 遺伝子治療 / 癌抑制遺伝子 / スチルスリポソーム / カチオニックリポソーム / プラスミドDNA
Research Abstract	Non viral vectorを用いた遺伝子治療を行なうにあたり、我々は新しい細胞増殖抑制遺伝子tobを導入することにした。TobタンパクはCDK2とCyclin Eとの反応を抑制することにより細胞周期G1 arrestをひき起こし細胞増殖抑制効果を持つ。また、tyrosine kinase typc膜受容体のerb B-2とも結合し、Ras系のシグナル伝達経路をblockする。今回、我々はDNAXより供与されたtob plasmid;pMS18をcompetentcellにtransfectし、大量培養を行ないQiagen plasmid purification kitを用いて、精製した。制限酵素EcoRIを用いて、plasmid;3.3kbおよびtob gene;1.2kbのバンドを確認した。 2種類のcationic liposome(freezed dry type/lipid film type)を用いて、tob plasmidを膵癌細胞にtransfectした。脂質濃度100nmolでは、脂質の細胞毒性が強く、約10nmolにおいて、細胞毒性が消失した。細胞毒性のないこの脂質量以下の条件で、tob plasmid導入群において細胞増殖抑制効果が認められた。また、lipid film typeの方が、freezed dry typeよりも抑制効果が強かった。臨床に応用できるdrug delivery systemとして、我々は、polyethylene glycolの結合したlipospme、“いわゆるstealth liposome"の導入を考えている。Stealth liposomeは体内に投与された際に、肝、脾などの細網内皮系への取り込みを回避でき、血中滞留性をあげることにより、腫瘍への集積性を高めることができる。我々は、中性子捕捉療法モデルを用いて、^<10>B封入stealth liposomeを作製し、単回投与6時間後においてコントロール群と比較して、膵癌腫瘍への取り込み増強と肝臓への取り込み抑制を即発γ線測定系による^<10>B濃度測定と、中性子ラジオグラフィーにて観察した。さらに4回静脈注射後、熱中性子を照射し、腫瘍増殖抑制効果を認めた。来年度は、癌細胞における癌抑制遺伝子(tob、p53等)の発現をConfocal Laser microscopyやlaserflow cyto meterにて確認し、cell cyclとetob/p53タンパクの局在の関係を調べていく。さらに、nonviral vectorによるgene deliveryの効率の改善のために、liposomcおよびplasmidの修飾を検討したい。

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Yanagie H.,Tanabe T.et al: "Tumor growth suppressing by the adenovirus-mediated introduction of a novel growth suppression gene,tob,in pancreatic cancer peritonitis model in vivo" Proceedings of 4th European Conference on Gene Therapy of Cancer. (in press).
[Publications] Yanagie H.,Ogura K.et al: "Neutron capture autoradiographic determination of "B distributions and concentrations in biological samples for boron neutron capture therapy" Nuclear Instrumentation and Methods A. (in press).
[Publications] Maruyama K.: "Enhancement of doxorubicin by encapsulation in long circulating thermosensitive liposomes combined with local hyperthermia" Long Circulating Liposomes: Old Drugs,New Therapeutics,edited by Martin Woodl and Gert Strom,Springer,Berlin. 97-109 (1998)
[Publications] Yanagie H.,Sumimoto H.et al: "Inhibition of human pancreatic cancer growth by the adenovirus-mediated introduction of a novel growth suppressing gene,tob,in vitro" Gene Therapt of Cancer,edited by Walden et al.,Plenum Press,New York, 91-96 (1998)
[Publications] Yanagie H.,Ogura K.et al: "Application of ^<10>B entrapped cationic liposome to boron neutron-capture therapyfor pancreatic cancer model in vivo" Frontiers in Neutron Capture Therapy,edited by Hawthorne et al. (in press),Plenum Press,New York(in press),

1998 Fiscal Year Annual Research Report

インテリジェント・ターゲッティングシステムを用いた難治性癌に対する遺伝子治療

Principal Investigator

柳衛 宏宣 東京大学, 医科学研究所, 助手 (30212278)

Research Products

[Publications] Yanagie H.,Tanabe T.et al: "Tumor growth suppressing by the adenovirus-mediated introduction of a novel growth suppression gene,tob,in pancreatic cancer peritonitis model in vivo" Proceedings of 4th European Conference on Gene Therapy of Cancer. (in press).

[Publications] Yanagie H.,Ogura K.et al: "Neutron capture autoradiographic determination of "B distributions and concentrations in biological samples for boron neutron capture therapy" Nuclear Instrumentation and Methods A. (in press).

[Publications] Maruyama K.: "Enhancement of doxorubicin by encapsulation in long circulating thermosensitive liposomes combined with local hyperthermia" Long Circulating Liposomes: Old Drugs,New Therapeutics,edited by Martin Woodl and Gert Strom,Springer,Berlin. 97-109 (1998)

[Publications] Yanagie H.,Sumimoto H.et al: "Inhibition of human pancreatic cancer growth by the adenovirus-mediated introduction of a novel growth suppressing gene,tob,in vitro" Gene Therapt of Cancer,edited by Walden et al.,Plenum Press,New York, 91-96 (1998)

[Publications] Yanagie H.,Ogura K.et al: "Application of ^<10>B entrapped cationic liposome to boron neutron-capture therapyfor pancreatic cancer model in vivo" Frontiers in Neutron Capture Therapy,edited by Hawthorne et al. (in press),Plenum Press,New York(in press),

柳衛宏宣東京大学, 医科学研究所, 助手 (30212278)