ゲルゾリン遺伝子、Ras抑制変異体を用いた膀胱癌に対する遺伝子治療の基礎的検討

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10470327
• Research Institution: HOKKAIDO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 篠原 信雄 北海道大学, 医学部・附属病院, 講師 (90250422)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 出村 孝義 北海道大学, 医学部・附属病院, 講師 (00133827) ; 葛巻 暹 北海道大学, 医学部, 教授 (80091445)
• Keywords: 膀胱癌細胞株 / ras抑制変異体 / 遺伝子導入 / 増殖抑制 / ゲルゾリン / 膀胱内注入

Research Abstract

1.ゲルゾリン遺伝子を用いた膀胱癌に対する遺伝子治療の開発
・ヌードマウス皮下移植をしたヒト膀胱癌細胞株に対し、ゲルゾリン遺伝子およびコントロール遺伝子産生パッケージング細胞を腫瘍に直接注射、腫瘍の増殖を検討した。コントロールでは腫瘍の著明な増殖を認めたが、ゲルゾリン遺伝子産生パッケージング細胞を注射した群では腫瘍の増殖の著明な抑制を認め、生存期間の有意な増加を認めた。
・現在アデノウイルスベクターの作成しorthotopic modelを用い解析中であるが、本ベクターの膀胱内注入によって、ヌードマウス膀胱内ヒト膀胱癌細胞の増殖が強く抑制されることが示されている。
2.ras抑制変異体N116Yを用いた膀胱癌に対する遺伝子治療の開発
・N116Yは強発現させた場合、膀胱癌細胞株をin vitroで強く増殖抑制するが、実際の遺伝子治療にあたっては、N116Yが十分発現されない場合も考えられるため、弱発現プロモーターをつけたプラスミド内にN116Y遺伝子を組み入れ、膀胱癌細胞株に導入。N116Yは弱発現の場合でも腫瘍形質を抑制することを確認した。
・N116Yの作用機構を解明する上で重要と考えられるrasの上流にあるEGF-R,Grb2,Sosの発現をWestern blot法を用い検討。Grb2,Sos蛋白質は、正常膀胱上皮細胞とくらべ、癌細胞株で著明に増強していた。
・N116Yのヒト膀胱癌細胞に対するin vivoでの効果を明らかにするため、ヌードマウス膀胱内へ、ヒト膀胱癌細胞株を移植するorthotopic modelを作成、アデノウイルスベクターに組み込んだN116Y遺伝子を経尿道的に膀胱内に注入した。その結果N116Yを注入した群は、コントロールであるLacZ遺伝子を注入した群に比べ、著明に腫瘍の増殖が抑制されていることが示された。

Research Products

• [Publications] 田中基幹: "膀胱癌に対する遺伝子治療"癌治療と宿主. 10. 43-49 (1998)
• [Publications] Shinohara, N., et al.: "The significance of C3G,one of ras guanine nucleotide exchange factors,in the proliferation of human bladder cancer cell lines"J. Urol. 159. 1060A (1998)
• [Publications] Tanaka, M., et al.l: "Gelsolin gene therapy by retrovirus producer cells for human bladder cancer in nude mice"Cancer Gene Therapy. 6. 482-487 (1999)
• [Publications] Watanabe, T., et al.: "Suppressive effects of dominant negative ras mutant N116Y on tansformed phenotypes of human bladder cancer cells"Cancer Letters. (in press).
• [Publications] Watanabe, T., et al.: "The significance of the Grb2 and Son of servenless (Sos) proteins in human bladder cancer cell lines"IUBMB Life. (in press).