2000 Fiscal Year Annual Research Report
口腔癌におけるEGFR異常発現および口腔癌抑制遺伝子候補doc-1に関する研究。
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10470384
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
松尾 拡 九州大学, 大学院・歯学研究院, 助教授 (70238971)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂井 英隆 九州大学, 大学院・歯学研究院, 教授 (80136499)
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| Keywords | cyclin- dependent kinase / CDK2 / doc-1 / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
口腔癌抑制遺伝子候補doc-1の遺伝子産物pDoc-1は、pDoc-1-GST融合蛋白と培養細胞のcell lysateを用いたpull down assayおよび細胞周期制御関連蛋白に対する各種抗体を用いたwestern blottingによりpDoc-1とcyclin-dependent kinase 2(CDK2)が結合するという予備的な実験結果をすでに得ていが、これまでそれを証明する十分な証拠は得られてなかった。そこで培養細胞へのpDoc-1とCDK2発現ベクターのトランスフェクション、免疫共沈降、westernblotting、protein kinase assayなどにより、pDoc-1はp34 CDK2(CDK2のmonomeric nonphosphorylated form)と特異的に結合し、(おそらくubiquitinの関わるproteolysisの経路を介して)細胞内CDK2を減少させ、かつCDK2-associated kinase activityを減少させることで細胞周期をG1期にシフトさせ、細胞増殖を抑制する可能性を示唆した。また、変異型pDoc-1蛋白を用いることで、CDK2との結合にはpDoc-1のC末端側109〜111番目のアミノ酸(TER)が重要であるという可能性が示唆された。
なおpDoc-1に対するモノクローナル抗体のひとつであるD12-18が認識する約24kDaの蛋白についてpDoc-1が修飾されたものなのか、あるいは全く別の蛋白であるのかについて明かにするためp24の精製を試みているが発現量が究めて微量のため、まだ成功していない。しかしながら2次元電気泳動とwestern blottingの結果よりpDoc-1およびp24とも塩基性蛋白である可能性が示唆され、同一のものでなくとも究めて類似した蛋白であると考えている。
また膜貫通ドメインを欠く変異型Epidermal growth factor receptorの機能解析についても着手しているが、いまだ十分な結果は得られてない。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] S.Shintani et al.: "p12^<DOC-1>is a novel-cyclin-dependent Kinase-2 associated protein."Mol.Cell Biol. 20. 6300-6307 (2000)
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[Publications] Kou Matuo et al.: "p12^<DOC-1>, a growth suppressor, associates with DNA polymerase α/primase."The FASEB Journal. 14. 1318-1324 (2000)
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[Publications] Kaori Shima et al.: "Incidence of human papillomavirus 16 and 18 infection and p53 mutation in patients with oral squamous cell carcinoma in Japan."Mol.Cell Biol. 38・5. 445-450 (2000)
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[Publications] Tamotsu Kiyoshima et al.: "Expression of p53 tumor suppressor gene in adenoid cystic and mucoepidermoid carcinomas of the salivary glands"Oral Oncology. 37・3. 111-118 (2001)
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[Publications] Masayo Morifuji et al.: "Differential expression of cytoskeleton after orthotopic implamtation of newly established human tongue cancer cell lines of defined metastatic ability."American Journal of Pathology. 156・4. 1317-1326 (2000)
