1998 Fiscal Year Annual Research Report
新規軟骨由来多機能成長因子エコジェニン/CTGFの作用機序に関する研究-受容体の分子クローニングと細胞間および細胞内情報伝達機構の解明-
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10470389
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
滝川 正春 岡山大学, 歯学部, 教授 (20112063)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
服部 高子 岡山大学, 歯学部, 助手 (00228488)
中西 徹 岡山大学, 歯学部, 助教授 (30243463)
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| Keywords | エコジェニン / 結合組織成長因子 / CTGF / 受容体 / 軟骨細胞 |
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| Research Abstract |
1) 組み換えエコジェニン/CTGFタンパクを^<125>Iで標識し、ヒト軟骨細胞様培養細胞株HCS-2/8への結合試験を行い、高親和性と低親和性の受容体がそれぞれ細胞あたり6.2x10^5個、6.18x10^6個存在すること見出した。
2) ^<125>I標識エコジェニン/CTGFと細胞膜受容体とをクロスリンク後、電気泳動してオートラジオグラフィーを行い、リガンド・受容体複合体の分子量が280kDaであることを明らかにした。
3) ^<125>I標識エコジェニン/CTGFと細胞膜受容体とをクロスリンク後、抗CTGF抗体で免疫沈降したのち、電気泳動してオートラジオグラフィーを行い、同様に分子量280kDaのバンドを認めた。
4) ウサギ肋軟骨成長軟骨初代培養細胞増殖・分化系で、軟骨細胞が成熟しさらには石灰化するに伴い^<125>I標識エコジェニン/CTGFの結合量が減少することを見出した。
5) 放射性正リン酸存在下でヒト軟骨細胞様培養細胞株HCS-2/8にエコジェニン/CTGFを作用させ、抗CTGF抗体で架橋後、免疫沈降し、電気泳動してオートラジオグラフィーを行ったところ、280kDaのバンドのリン酸化の亢進が刺激後5分でみられその効果は30分で消失した。
6) ヒト軟骨細胞様培養細胞株HCS-2/8をエコジェニン/CTGFで刺激するとリン酸化MAPキナーゼが増加した。
7) ウサギ肋軟骨成長軟骨初代培養細胞を副甲状腺ホルモンで刺激して成熟させると^<125>I標識エコジェニン/CTGFの結合量は減少し、一方、レチノイン酸やインターロイキン-1で分化を抑制すると増加した。
8) 血管内皮細胞もエコジェニン/CTGFの標的細胞であることが判明した。
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[Publications] Sasaki,K.: "Nitric oxide mediates interleukin-1-indeced gene expression of matrix metalloproteinases and basic fibroblast growth factor in cultured rabbit articular chondrocytes" J.Biochem.123. 431-439 (1998)
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[Publications] Shimo,T.: "Inhibition of endogenous expression of connective tissue growth factor by its antisense oligonucleotide and antisense RNA suppresses proliferation and migration of vascular endothelial cells" J.Biochem.124. 130-140 (1998)
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[Publications] Nishida,T.: "Demonstration of receptors specific for connective tissue growth factor on a human chondrocytic cell line (HCS-2/8)" Biochem.Biophys.Res. Commun.247. 905-909 (1998)
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[Publications] Tamatani,T.: "Establishment of the enzyme-linked immunosorbent assay for connective tissue growth factor (CTFG) and its detection in the sera of biliary atresia" Biochem.Biophys.Res. Commun.251. 748-752 (1998)
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[Publications] Ohnishi,H.: "Increased expression of connective tissue growth factor in the infarct zone of experimentally induced myocardial infarction in rats" J.Mol.Cell Cardiol.30. 2411-2422 (1998)
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[Publications] 滝川正春: "基礎からみた整形外科領域のサイトカイン" 整形・災害外科. 41. 3-12 (1998)
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[Publications] 滝川正春: "内軟骨性骨形成に最も重要な新規成長因子 CTGF" 細胞工学. 17. 357-362 (1998)
