抗-細胞接着マトリックスのシグナルの伝達機構と細胞機能の研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10480161
• Research Institution: Aichi Medical University
• Principal Investigator: 木全 弘治 愛知医科大学, 分子医科学研究所, 教授 (10022641)
• Keywords: 抗-細胞接着 / PG-M / バーシカン / アネキシンVI / ヒアルロン酸 / シグナル伝達 / コンドロイチン硫酸 / アルタティブスプライシング / インテグリンクラスターリング

Research Abstract

1)annexin VI cDNAを非発現のヒト細胞株A431に導入し、発現量の異なった複数のクローンを得た。発現量依存的にFACS解析によりannexin VIが細胞表面に検出されること、さらにコンドロイチン硫酸(CS)コート培養皿に接着することを確認し、コンドロイチン硫酸レセプターとしてannexin VIの関与の証拠を得た。annexin VIの部分ドメインを発現した細胞のCS結合活性を測定し、C末端側の関与を明らかにした。シグナル伝達系の有無を明らかにするため、annexin VIの発現量の異なる細胞について、抗-細胞接着分子PG-Mによる細胞接着反応阻害活性を調べたが明確な相関関係を認めなかった。他のannexinの代行作用によると思われたが、同様にCS結合活性をもつannexin IVのcDNA導入細胞はCSコート培養皿には結合しなかった。次いでannexin VIから抗-細胞接着シグナルの有無と伝達機構をPG-Mコートビーズ法を用いて解析した。しかし、期待したビーズヘのannexin VIの集積が観察されず、またフィブロネクチンコートビーズのインテグリンを介したアクチン集積にannexin VIの共分布が観察され、annexin VIを抗-細胞接着シグナルを発するレセプターであるとする予想と異なり、その機構を再考する必要が出てきた。2)抗-細胞接着活性部位であるコンドロイチン硫酸鎖を持たないスプライスドフォーム(PG-MV3)のヒト型のマウス培養細胞における強制発現により、この細胞の内在性のコンドロイチン硫酸鎖をもつPG-Mによる抗-細胞接着性マトリックスの人工改変とその細胞挙動への影響の有無を調べたが、特異な変化は観察されなかった。現在、これらの実験をin vivoで行えるPG-MV3を強制発現するトランスジェニック、さらにV3フォームのみのPG-Mを発現するノックインマウス系の開発を開始した。

Research Products

• [Publications] M. Zhao, T. Tanaka, et al.: "Immunohistochemical evaluation of the small and large proteoglycans in pleomorphic adenoma of salivary glands."J Oral Pathol Med. 28. 37-42 (1999)
• [Publications] N. Itano, T. Sawai, et al.: "Relationship between hyaluronan production and metastatic potential of mouse mammary carcinoma cells."Cancer Res. 59. 2499-2504 (1999)
• [Publications] D. Kida, M. Yoneda, et al.: "The SHAP-HA complex in sera from patients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis."The Journal of Rheumatology. 26. 1230-1238 (1999)
• [Publications] N. Itano, T. Sawai, et al.: "Three isoforms of mammalian hyaluronan synthases have distinct enzymatic properties."J Biol Chem. 274. 25085-25092 (1999)
• [Publications] Y. Yamada, N. Itano, et al.: "Receptor for hyaluronan-mediated motility and CD44 expressions in colon cancer assessed by quantitative analysis using real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction."Jpn J Cancer Res. 90. 987-992 (1999)
• [Publications] T. Ichikawa, N. Itano, et al.: "Increased synthesis of hyaluronate enhances motility of human melanoma cells."J Invest Dermatol. 113. 935-939 (1999)
• [Publications] M. Yoshida, N. Itano, et al: "In vitro synthesis of hyaluronan by a single protein derived from mouse HAS1 gene and characterization of amino acid residues essential for the activity."J. Biol Chem. 275. 497-506 (2000)
• [Publications] 板野直樹,山田陽一,et al.: "癌転移研究の手法 癌転移と細胞外マトリックス"癌と化学療法. 26. 1663-1668 (1999)
• [Publications] 本田雅規,木全弘治.: "3細胞外マトリックス分子と細胞との情報伝達."ティッシュ・エンジニアリング-組織工学の基礎と応用.名古屋大学出版会. 32-42 (1999)
• [Publications] 木全弘治.: "7.細胞外マトリックスとプロテオグリカン."細胞外マトリックス-基礎と臨床-. 愛智出版. 162-187 (2000)