1999 Fiscal Year Annual Research Report

イノシトールリン脂質結合タンパクの構造と細胞膜局在調節機構

Research Project

Project/Area Number	10490023
Research Institution	Himeji Institute of Technology
Principal Investigator	八木澤仁姫路工業大学, 理学部, 助教授 (40192380)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	平田雅人九州大学, 歯学部, 教授 (60136471) 鎌田英明姫路工業大学, 理学部, 助手 (10233925) 平田肇姫路工業大学, 理学部, 教授 (40049052) 樋口芳樹京都大学, 大学院・理学系, 助教授 (90183574)
Keywords	ホスホリパーゼC / プレクストリン相同性領域 / 浸透圧ショック / 核移行 / 核外移行シグナル / トランスロケーション / 緑色蛍光タンパク(GFP)
Research Abstract	本研究では、デルタ型ホスホリパーゼ(PLC-δ)を中心に、脂質結合性の細胞内情報タンパクの細胞内局在状態の調節が、細胞機能にどのような影響を与えるかという点を解析することを目的としている。我々は、昨年度、PLC-δ1のPH領域に依存した細胞膜への局在が、浸透圧ショックや機械的刺激により、著しく変化することを見出した。また、PLC-δ1は、未同定のキナーゼにより細胞内で構成的なリン酸化を受けることも明らかにした。本年度は、低浸透圧ショックにより形質膜から離れたPLC-δ1が、細胞内のどのような部位に移行するのかを、GFP融合PLC-δ1、PH領域のみのGFP融合タンパクをMDCK細胞に発現させ、詳細に解析した。その結果、PLC-δ1は、低浸透圧ショックにより、数秒から30秒ほどのきわめて短時間の間に、核の周辺、特に小胞体に局在するようになることが、生化学的手法ならびに免疫蛍光抗体法との組み合わせの実験によって明らかになった。現在、このターゲッティングに必要な分子内領域の同定と、移行メカニズムの解析を行っている。我々はさらに、PLC-δ1のEFハンドドメインの一部に典型的なロイシンリッチ核外移行シグナル(NES)配列が存在し、この配列が実際にこの分子の核外移行に機能しうることを、合成ペプチドの核内へのマイクロインジェクションや、NES依存的核外移行の阻害剤であるレプトマイシン存在下における、GFP-PLC-δ1および内在性PLC-δ1の核内蓄積によって明らかにした。現在、PLC-δ1の核移行シグナルの同定、およびそのメカニズムの解析を行いつつある。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] 八木澤仁: "ホスホリパーゼC-S:ドメイン構造と機能調節"生化学. 71. 526-531 (1999)
[Publications] 藤井誠: "PH領域を介したPLC-δ1の細胞内局在性の制御"蛋白質・核酸・酵素. 44. 1525 (1999)
[Publications] Yagisawa H.: "Phospholipase C-delta and related molecules"Biochem.Soc.Transact. 27. 652-657 (1999)
[Publications] Matsuki N.: "Antibodies against the PH domain of phospholipase C-deltal inhibit the Ins(145)P_3-mediated Ca^<2+> release from Endoplasmic reticulum"Biochem.Biophys.Res.Commun. 260. 42-47 (1999)
[Publications] Nozaki,T.: "Cloning and characterization of a gene encoding phosphatidylinositol specific phospholipase C from Trypanosoma cruzi"Mol.Biochem.Parasitol.. 102. 283-295 (1999)
[Publications] Yamamoto T.: "Involvement of EF hand motifs in the Ca^<2+>-dependent binding of the pleckstrin homology domain to phosphoinositides"Eur.J.Biochem.. 265. 481-490 (1999)
[Publications] Yamaga M.: "Phospholipase C deltal contains a functional nuclear export signal sequence"J.Biol.Chem.. 274. 28537-28541 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

イノシトールリン脂質結合タンパクの構造と細胞膜局在調節機構

Principal Investigator

八木澤 仁 姫路工業大学, 理学部, 助教授 (40192380)

Research Products

[Publications] 八木澤 仁: "ホスホリパーゼC-S:ドメイン構造と機能調節"生化学. 71. 526-531 (1999)

[Publications] 藤井 誠: "PH領域を介したPLC-δ1の細胞内局在性の制御"蛋白質・核酸・酵素. 44. 1525 (1999)

[Publications] Yagisawa H.: "Phospholipase C-delta and related molecules"Biochem.Soc.Transact. 27. 652-657 (1999)

[Publications] Matsuki N.: "Antibodies against the PH domain of phospholipase C-deltal inhibit the Ins(145)P_3-mediated Ca^<2+> release from Endoplasmic reticulum"Biochem.Biophys.Res.Commun. 260. 42-47 (1999)

[Publications] Nozaki,T.: "Cloning and characterization of a gene encoding phosphatidylinositol specific phospholipase C from Trypanosoma cruzi"Mol.Biochem.Parasitol.. 102. 283-295 (1999)

[Publications] Yamamoto T.: "Involvement of EF hand motifs in the Ca^<2+>-dependent binding of the pleckstrin homology domain to phosphoinositides"Eur.J.Biochem.. 265. 481-490 (1999)

[Publications] Yamaga M.: "Phospholipase C deltal contains a functional nuclear export signal sequence"J.Biol.Chem.. 274. 28537-28541 (1999)

八木澤仁姫路工業大学, 理学部, 助教授 (40192380)

[Publications] 八木澤仁: "ホスホリパーゼC-S:ドメイン構造と機能調節"生化学. 71. 526-531 (1999)

[Publications] 藤井誠: "PH領域を介したPLC-δ1の細胞内局在性の制御"蛋白質・核酸・酵素. 44. 1525 (1999)