1999 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子工学的手法を用いた低濃度水中病原微生物の検出手法の開発
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10555189
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
大垣 眞一郎 東京大学, 大学院・工学系研究科, 教授 (20005549)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神子 直之 茨城大学, 工学部, 助教授 (70251345)
矢野 一好 東京都立衛生研究所環境保健部, 主任研究員
古米 弘明 東京大学, 大学院・工学系研究科, 教授 (40173546)
片山 浩之 東京大学, 大学院・工学系研究科, 助手 (00302779)
大瀧 雅寛 お茶の水女子大学, 人間文化研究科, 助教授 (70272367)
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| Keywords | PCR / ウイルス / 水中微生物 / 検出 / 濃縮 / ゲノム / 陰電荷膜 / 酸洗浄 |
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| Research Abstract |
1.はじめに 水の微生物学的安全性を確保するための重要課題として、水系感染性の腸管系ウイルスが挙げられる。ウイルスを検出する方法としてはPCR法が簡便性および検出感度に優れている。一方、既存のウイルス濃縮法は、PCR法による検出に適していない。昨年は、RT-PCR法による検出を前提としたウイルス濃縮法(陰電荷膜吸着・酸洗浄・アルカリ誘出法)を開発したが、本年はその手法を腸管系ウイルスの一種であるポリオウイルス1型に対して試みた。
2.実験方法 ポリオウイルスのゲノムRNAをTaqMan PCR法を用いて定量する方法を開発した。また、ポリオウイルス濃度をプラック法によっても測定している。ポリオウイルスおよびそのゲノムRNAの様々なpH条件下での生残性を調べ、ウイルス濃縮に用いることのできるpH域を決定した。また、ウイルス濃縮のMgCl_225mMを加えたろ過原水を約100ml/minでろ過したのち、pH3程度希硫酸溶液を洗浄液として膜にとおした。誘出工程では、pH10.5〜12程度のNaOH溶液5mlを同じ膜でろ過し、ろ液を回収して中和した。
3.実験結果および考察 プラック法によりポリオウイルスの回収率を算定する場合には、酸洗浄(pH3)200ml誘出液pH10.5、5mlのNaOH溶液によって、見かけ上は100%近い回収率を示した。また、TaqMan PCR法を用いたポリをウイルスの定量を用いた場合にも、酸洗浄によるウイルス回収率の向上が確認された。
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Research Products
(2 results)
