1998 Fiscal Year Annual Research Report
酵母の多様なチトクロームP450遺伝子を利用する炭化水素鎖末端酸化化合物の生産
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10556015
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
太田 明徳 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (30125885)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
寺沢 真人 三菱化学, 筑波研究所, 主任研究員
湯川 英明 地球環境産業技術研究機構, 微生物分子機能研究室, 主席研究員
堀内 裕之 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助手 (00209280)
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| Keywords | endoplasmic reticulum / yeast / Candida maltosa / cytochrome P450Alk / Yarrowia lipolytica / dicarboxylic acid / cytochrome P450 reductase / heterologous expression |
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| Research Abstract |
本研究計画では、申請者らの単離した炭化水素鎖を酸化する酵母の多様なチトクロームP450の遺伝子を必要に応じてその還元酵素とともに、異種酵母あるいは細胞壁の安定なコリネ型細菌に導入し、長鎖ジカルボン酸を含む末端酸化炭化水素鎖化合物の新しい生産系を確立することを目的とする。
本年度の計画ではSaccharomyces cerevisiaeYPH500株をはじめとする標準的酵母宿主に、GAL1遺伝子あるいはADH1のプロモーターの下流にCandida maltosaの各種チトクロームP450ALK(以下P450ALK)をコードするALK遺伝子を繋いだYEpプラスミド(pYPR-ALK1他)を導入する。これは既に,ALK1,ALK2,ALK3,ALK5,ALK7,ALK8について完成した。一方,Yarrowia lipolyticaの8種のチトクロームP450ALKについても同様のものを作成中である。また、P450ALKの還元酵素遺伝子についても、C.maltosa由来のもの及びYarrowia lipolytica由来のもののそれぞれについてクローン化したものについて、P450ALKとの共発現系を作成し、S.cerevisiae株に導入する計画であった。これは既にSchunckらのグループで同種のものが作製されているので入手を検討している。
また,最近工業用ジカルボン酸生産菌はC.maltosaの一種であることが判明し,この高生産菌のP450ALK生産を調べたところ,いくつかのP450遺伝子について高い発現が見られた。その発現機構を調べ,ジカルボン酸生産への寄与を検討中である。
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[Publications] Ohkuma,M.,Zimmer,T.,et al.: "Isozyme function of n-alkane-inducible cytochrome P450 in Candida maltosa revealed by sequential gene disruption." Journal of Biological Chemistry. 273. 3948-3953 (1998)
