1998 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
10557074
|
|---|
| Research Institution | Tohoku University |
|---|
Principal Investigator |
成澤 邦明 東北大学, 医学部, 教授 (90004647)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 洋一 東北大学, 医学部, 助手 (80216457)
呉 繁夫 東北大学, 医学部, 助手 (10205221)
松原 洋一 東北大学, 医学部, 助教授 (00209602)
|
|---|
| Keywords | 既知遺伝子変異 / Taq Man ASA法 / 自動既知変異検出システム / アレル特異的プライマー / フェニルケトン症 / 糖原病1型 / Tay-Sachs病 / ホロカルボキシラーゼ合成酵素欠損症 |
|---|
| Research Abstract |
既知遺伝子変異(多型を含む)の検出は遺伝病の遺伝子診断ばかりでなく、家族性腫瘍やCommon Diseaseの危険因子の検査、さらには個人識別などの法医鑑定上でも極めて有用な手段となっている。本研究は既知小変異を迅速に精度よく検査するための自動既知変異検出システムTaqManASA法を確立する事にある。TaqManASA法はアレル特異的プライマー(野生型プライマー及び変異型プライマー)によって産生されたPCR産物を蛍光強度としてリアルタイムで測定し、自動化したものである。本研究によってTaqManASA法が確立できた変異は日本人患者に多くみられる変異が中心であり、具体的にはフェニルケトン症のR111X、IVS-4、Y204C、R241C、R243Q、R252W、R278W、IVS-9、Y356X.R407W、R413P変異、糖原病1a型のR170X、g727t変異、糖原病1b型のW118R変異、Tay-Sachs病のIVS-5、del613C変異、軟骨発育不全症のG380R変異、ホロカルボキシラーゼ合成酵素欠損症のL237P、del G1067変異である。すべてのアレル特異的プライマーは3'端から-2或いは-3にミスマッチ塩基を導入して作成した。PCRの進行により、プライマーの3'端の塩基がマッチしたテンプレイトでは蛍光強度が増加するが、マッチしていなければ強度は増加しない。その強度の測定はABI PRISM 7700 Sequence detection Systemでリアルタイムで行った。PCR増幅量の多寡は蛍光シグナルの検出スレショルドを越えるサイクル数(C_T)で評価した。今回検討したすべての変異で正常、変異ホモ接合体、ヘテロ接合体の識別が可能であり、本法が自動既知変異検出法として極めて有用な方法であることを示した。
|
-
[Publications] M.Hiratsuka,et al.: "Identification of holocarboxylase synthetase proteins in human placenta" Biochemica Biophysica Acta. 1385. 165-171 (1998)
-
[Publications] O.Sakamoto,et al.: "A subtype of pyridoxine-dependent epilepsy with normal CSF glutamate concentration" Journal of Inherited Metabolic Disease. 21. 431-432 (1998)
-
[Publications] S.Kure,et al.: "Molecular analysis of glycogen storage disease type Ib" Biochem.Biophys.Res.Commn.248. 426-431 (1998)
-
[Publications] K.Wataya,et al.: "Identification of two missense mutations in the CPT2 gene" Human Mutation. 11. 377-386 (1998)
-
[Publications] Y.Nagasaki,et al.: "Reversal of hypopigmentation in PKU model mice by gene transfer" Pediatric Research. 45(in press). (1999)
-
[Publications] H.Mikami,et al.: "Molecular analysis of methylmalonyl-CoA mutase deficiency" Journal of Human Genetics. 44. 35-39 (1999)
