創傷を負った上皮に特異的な遺伝子組み替えを用いた表皮の再上皮化過程に関する研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10557080
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 高橋 健造 京都大学, 医学研究科, 助手 (80291425)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福島 大吉 小野薬品工業(株), 水無瀬研究所, 所長チームリーダー ; 鈴木 義久 京都大学, 医学研究科, 講師 (30243025)
• Keywords: 創傷治癒 / ケラチン / トランスジェニックマウス / 遺伝子組みかえ

Research Abstract

創傷治癒過程後期、潰瘍局面が再上皮化された後の新生表皮細胞が基底細胞あるいは有棘細胞のどちらの細胞に由来するのかを決定するために、創部の表皮に特異的な遺伝子の組み替えを誘導し、導入した遺伝子自体をマーカーとして、潰瘍面に遊走する有棘細胞の追跡を可能とする遺伝子導入動物の作成をしている。このための導入遺伝子として、1つ目の融合遺伝子は、バクテリオファージ由来のCREリコンビネースを、創部表皮の有棘細胞にのみ特異的に誘導するためのもので、上記のヒトケラチン6由来のプロモーターの下流にCREリコンビネースを連結した。さらに、遺伝子をマーカーとして使うための次のレポーター遺伝子を作成した。ガラクトシダーゼ遺伝子の両端に、CREリコンビネースによって認識されるLoxP配列を配置しておく。この第一レポーターの下流には、第二のレポーター遺伝子として、緑色蛍光蛋白(GFP)を繋げ、これらは上流に存在するウイルスのプロモーターにより誘導されように構築した。この2種類の融合遺伝子を染色体上に導入されたマウスを作成し、創傷治癒実験に用いる。これらの導入遺伝子を、まずは、培養表皮細胞の形質転換に用い、これらが実際に表皮細胞内に発現し有効に働くことを確認した。また、これらの導入遺伝子をもつトランスジェニックマウスを作成し、それぞれについて5-10系統のマウスを得た。これらのトランスジェニックマウスの解析のため以下の実験を行った。1)サザンプロット法によるトランスジェニックマウスの選定2)抗Cre、GFP、b-Gal抗体を用いた導入遺伝子の発現の検討現在、これらのマウスの成長を待ち、Fl世代の樹立後に、創傷治癒実験を開始する予定である。

Research Products

• [Publications] Kenzo Takahashi: "The two functional KeraTin 6 genes of mouse are differentably vegnlorteal and evolved independently from their human orthology" Genomics. 53. 170-183 (1998)
• [Publications] Kenzo Takahashi: "Using transgenic models to study the pathogenesis of KeiaTin based inherited sia diseasea." Journal of Dermatological Science. (in press).