アレルギー疾患の遺伝素因(PAFアセチルヒドロラーゼ欠損)の分子遺伝学的解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10557223
• Research Institution: University of Shizuoka
• Principal Investigator: 三輪 匡男 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (10046287)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林眞 知子 静岡県立大学, 薬学部, 助手 (50137072) ; 前田 利男 静岡県立大学, 薬学部, 助教授 (00137069) ; 菅谷 純子 静岡県立大学, 薬学部, 講師 (30098131)
• Keywords: PAF / PAFアセチルヒドロラーゼ / 遺伝素因 / 腎不全

Research Abstract

炎症・アレルギー反応に関わる重要なメディエーターであるPAFはPAFアセチルヒドロラーゼ(PAF-AH)により分解されその活性を失い、PAF-AHが生体内の作用発現に極めて重要な働きを持つことが推察される。申請者らは先天性PAF-AH欠損家系を初めて発見するとともに、この酵素欠損が代表的アレルギー疾患である小児喘息の遺伝素因であることを報告している。米国の研究グループからこの酵素蛋白質(46k)のcDNA塩基配列が報告されているが、申請者らはSDSポリアクリルアミド電気泳動法とPAF-AH活性染色法を組み合わせた新規な手法を用いてヒト血漿中には約10kに相当する糖鎖と36kの蛋白質で構成された糖蛋白質であるPAF-AHの存在を証明することが出来た(業績2)。ヒト血漿30lから分離したこの糖蛋白質型PAF-AHの遺伝子情報を得る為にABIプロテインシーケンサーを用いてN末端アミノ酸配列の解析を進めたが、精製酵素蛋白質が極めて微量であったことから、さらに50lの血漿から精製を進めている。一方46k PAF-AHの点変異DNA情報(G994T)を基にステロイド反応性小児腎不全(SRNS)患者の白血球からDNAを抽出し、SepaGeneキットで精製し、PCR法で変異遺伝子の解析を進めた結果、この異常遺伝子(G994T)を持つ患者は対照群(G994G)と比較し再発率が有意に高いことを報告することが出来た(業績3)。この結果はPAFが腎臓疾患にもメディエーターとして機能し、その消去酵素の活性レベルが発症・進展に関わっていることを示唆する結果を得ることが出来た。

Research Products

• [Publications] Masahiro Suzuki et al.: "Continuous binding of the PAF molecule to it's receptor is necessay for the long-term aggregation of platelets." Am.J.Physiol.274(Cell Physiol.43). C47-C57 (1998)
• [Publications] Masaki Akiyama et al.: "Identification of a major PAF acetylhydrolase in human serum/plasma as a 43 kDa glycoprotein containing about 9 kDa asparginetion jugated sugar chain(s)." J.Biochem.123. 786-789 (1998)
• [Publications] Hong Xu et al.: "Platelet-activating factor acetylhydrolase gene mutation in Japanese nephrotic children." Kidney International. 54. 1867-1871 (1998)
• [Publications] 三輪匡男: "生物薬科学実験講座3脂質I第12章リン脂質(3)代謝・合成・分解II-3-4(3)アセチルヒドロラーゼ" 井上圭三,中川靖一編集,廣川書店, 9 (1998)
• [Publications] 三輪匡男,菅谷純子: "The 18th Rokko confeirence メキイエーター2.PAF分解酵素欠損と喘息" 中島重徳,宮本昭正,小林節雄編 ライフサイエンス出版, 7 (1998)