血中酸化LDL定量法による新しい体外診断薬への展開

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10557225
• Research Institution: Teikyo University
• Principal Investigator: 高野 達哉 帝京大学, 薬学部, 教授 (40124995)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 東 祐輔 帝京大学, 薬学部, 助手 (60286979) ; 森 雅博 帝京大学, 薬学部, 助手 (00230079) ; 板部 洋之 帝京大学, 薬学部, 助教授 (30203079) ; 木村 順二 テルモ, 技術開発本部・医薬品開発部門, 主任研究員 ; 藤本 康之 帝京大学, 薬学部, 助手 (60317724)
• Keywords: 過酸化脂質 / マクロファージ / リポタンパク質 / フォスファチジルコリン / モノクローナル抗体

Research Abstract

本研究は酸化ホスファチジルコリン(酸化PC)を認識するモノクローナル抗体(FOH1a/DLH3)を一次抗体に、抗ApoB抗体を二次抗体としたサンドイッチ・エライザ法により虚血性心疾患をはじめとする血中酸化LDLを定量し、体外診断薬への展開を目的とする。
具体的には(1)他疾患と酸化LDLとの相関性、(2)酸化LDLの生成機構、(3)酸化LDLの排除機構という観点から検討した。その結果、0.5〜10ngの範囲で微量の血中酸化LDLを定量することが可能になり、しかも、血液の保存状態により測定値はあまり影響されず、再現性も非常に高いことが示された。ちなみに、添加回収率は88.1〜95.5%、ヘモグロビン、EDTA、ヘパリン、アスコルビン酸などの夾雑物の測定値への影響はほとんど認められない。この手法を用いることによって、虚血性心疾患の患者血漿中の酸化LDL値は健常人の約2.3倍であることが明らかになった。
さらに、本抗体に対する抗原物質(とくに酸化LDL)の一部はリソソーム顆粒内で未分解産物として蓄積する可能性が明らかになった。酸化を受けたLDLは分解されにくく、種々タンパク分解酵素に抵抗性を示すようである。そして、不溶性の形状を呈しているようである。

Research Products

• [Publications] Mori M., Takano T. et al: "Formation of lipid droplets enriched with phospholipid-cholesterol complexes in foam cells by hyperlipidemic serum"J. Lipid Res.. 42. 1771-1781 (2001)
• [Publications] Ehara S., Takano T et al: "Oxidized low density lipoprotein relates to plaque destabilization in human coronary atherosclerotic lesions. Circulation"Circulation. April 17. 1955-1960 (2001)
• [Publications] Noriyuki S., Takano T. et al: "Glycoxidation and lipid peroxidation of low-density lipoprotein can synergistically enhance atherogenesis"Cardiovascular Res.. 49. 466-475 (2001)
• [Publications] Morita M., Takano T. et al: "Insulin-degrading enzyme exists inside of rat liver peroxisomes and degrades oxidized protein"Cell Structure and Function. 25. 309-315 (2000)
• [Publications] Itabe H., Takano T. et al: "Oxidized low density lipoprotein : The occurrence and metabolism in circulation and in foam cell"J.Atheroscler. Thromb.. 7. 123-131 (2000)
• [Publications] Khono, H., Takano, T. et.al.: "Simple and practical sandwich-type enzyme immunoassay for human oxidatively modified low density lipoprotein using antioxidized phosphatidylcholine monoclonal..."Clinical Biochem.. 33(4). 243-253 (2000)
• [Publications] Itabe, H., Takano, T. et.al.: "Preparation of radioactive aldehyde-containing phosphatidylcholine"Analyticlal Biochem.. 285. 151-155 (2000)
• [Publications] Toshima, S., Takano, T. et.al.: "Circulating oxidized low density lipoprotein levels-A biochemical risk marker for coronary heart disease"Arterioscler Thromb Vasc Biol.. 20. 2243-2247 (2000)
• [Publications] Itabe, H., Takano, T. et.al.: "Lysosomal accumulation of oxidized phosphatidylcholine-apolipoprotein B complex in macrophages : intracellular fate of oxidized low density lipoprotein"Biochim. Biophys. Acta. 1487. 233-245 (2000)
• [Publications] Fukasawa, M., Takano, T. et.al.: "Reduction of sphingomyelin level without accumulation of ceramide in chinese hamster ovary cells affects detergent-resistant membrane domains and ...."J. Biol. Chem.. 275(44). 34028-34034 (2000)
• [Publications] Imanaka, T., Takano, T., et.al.: "Characterizaion of the 70-kDa peroxisomal membrane protein,and ATP binding cassette transporter"J. Biol. Chem.. 274(17). 11968-11976 (1999)
• [Publications] Mori, M., Takano, T. et.al.: "Presensce of phospholipid-neutral lipid complex structures in atherosclerotic lesions as detected by a novel monoclonal antibody"J. Biol. Chem.. 274(35). 24824-24837 (1999)
• [Publications] 板部 洋之, 高野 達哉: "日本臨床"リポ蛋白代謝の分子機構. 29-36 (2001)
• [Publications] 板部 洋之, 高野 達哉: "The Lipid"リポ蛋白「酸化」の生化学とリポ蛋白代謝. 236-241 (1999)