1999 Fiscal Year Annual Research Report
生体高分子の機能を応用した新しい遺伝子デリバリーシステムの開発
| Project/Area Number |
10557234
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
中西 真人 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (10172355)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長谷川 護 株式会社DNAVEC研究所, 研究所長
|
|---|
| Keywords | 膜融合リポソーム / センダイウイルス / テロメア / 人工染色体 / RNAレプリコン / 遺伝子導入 |
|---|
| Research Abstract |
本年度の研究では以下の成果を得た。
1) 膜融合リポソームの実用化に向けて製剤としての安全性に関わる問題を検討し、病原性ウイルスの混入を10^<-16>以下に抑えながら活性と安全性を保つことができる精製と不活化の条件を決定した。また最終的な製剤としての形状を検討した。
2) 人工染色体構築のための必須条件である染色体の安定性を決定する因子の解析を進め、染色体末端のテロメア配列に結合するTRF1というタンパク質にその活性があることを見いだした。さらに、TRF1は単に染色体を安定化する因子であるばかりでなく、細胞の寿命を決定し不死化に深く関与するなど、遺伝子治療において外来遺伝子を導入した細胞の寿命を選択的に延ばすなどの新しい方向性を示した。
3) 自立複製しつつ細胞質で遺伝情報を発現するRNAレプリコンの開発に必要なRNA依存性RNAポリメラーゼの検討を進め、センダイウイルスのNPタンパク質にその活性があることを同定した。またRNAレプリコンの鋳型となるcDNAを作成し、ラムダファージを使って安定に大量調整することに成功した。
4) 新しい発想の非ウイルスベクターとしてヒト免疫不全ウイルスのTat タンパク質由来のペプチドを表面に発現するTat-Phage の開発を行い、このペプチドに依存して細胞内にファージ粒子内のDNAが導入されて発現することを見出した。この結果、Tat peptide を使った合成ポリマーによる遺伝子導入ベクターの開発に道を開くことができた。
|
-
[Publications] Mizuguchi,H.,et al.: "Fusion of Sendai virus with liposome depends on only F protein,but not HN protein"Virus Res.. 59. 191-201 (1999)
-
[Publications] Watanabe,A.,et al.: "Target Cell Specificity of Fusogenic Liposome-Membrane Fusion-MediatedMacromolecule Delivery into Human Blood Mononuclear Cells"Biochem. Biophys. Acta. 1416. 339-348 (1999)
-
[Publications] Nakanishi,M.,et al.: "Gene Delivery Systems Using the Sendai Virus"Mol. Memb. Biol.. 16. 123-127 (1999)
-
[Publications] Nakanishi,M.,et al.: "Positively charged liposomes functions as an efficient immunoadjuvant in inducing cell-mediated immune response to soluble proteins"Journal of Controlled Release. 61. 233-240 (1999)
-
[Publications] Miyake,K. et al.: "Transforming growth factor-beta 1 stimulates contraction of human glioblastoma cell-mediated collagen lattice through enhanced alpha 2 integrin expression"Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 59. 23-33 (2000)
-
[Publications] Nakanishi,M.,et al.: "Nuclear Targeting of DNA"European Journal of Pharmaceutical Science. (印刷中).
