1999 Fiscal Year Annual Research Report

医学的有効性の向上を目的とした組換え型アルブミン製剤の設計と機能性評価

Research Project

Project/Area Number	10557245
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	小田切優樹熊本大学, 薬学部, 教授 (80120145)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	桑田茂喜化学及血清療法研究所, 主任研究員今井輝子熊本大学, 薬学部(寄附講座), 客員教授 (70176478) 棚瀬純男熊本大学, 医学部, 助教授 (20112401)
Keywords	アルブミン / 遺伝子組換え技術 / 分子設計 / 機能性評価 / 血液製剤
Research Abstract	本研究は、安全性ならびに有効性に優れたアルブミン製剤の開発を最終目標とし、組換えアルブミンを発現させ、効率的に精製し、それらの生物学的、動態特性について検討し、以下の知見を得た。 1)発現ベクターpHIL-D2にL10(シグナル配列)及びポリA配列を含む変異を施したHSAcDNA(K199A,K525A)を挿入した。この発現ベクターでP.Pastoris(GS115株)を形質転換し、BMMY培地で4日間培養後、培地上清より硫安分画(60%,pH4.4)で濃縮、粗精製を行い、ブルーセファロースCL-6Bに付し、変異HSA(K199A,K525A)の精製を行った。 2)精製した変異HSA(K199A,K525A)の構造特性について、遠紫外及び近紫外領域CDスペクトル、抗HSAポリクローナル抗体を用いて検討した。その結果、二次構造、三次構造及び抗体の認識性に血漿由来HSAと有意な差は観察されなかった。 3)変性剤である塩酸グアニジン及び示差走査熱量計(DSC)を用いて化学的安定性、熱安定性について検討した結果、各熱力学的パラメータはK199A-,K525A-HSAともに同様の値を示し、血漿由来HSAとの間に有意な差は観察されなかった。 4)薬物結合特性について検討した結果、変異HSA(K199A,K525A)分子上の薬物結合サイトの存在様式は血漿由来HSAとほぼ同様であることが示唆された。また、両HSAは同程度のエステラーゼ類似作用を示し、その活性残基と言われている411位のチロシン残基周辺の環境は血漿由来HSAと有意な差は観察されなかった。 5)^<125>I-K199A-HSAのラットでの体内動態について検討した結果、血漿中濃度推移は2相性を示し、消失相(β相)から算出した半減期(t1/2)は約30時間であり、血漿由来HSAと同様の体内動態特性を示した。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Y. Tsutsumi et al: "Interaction between two earboxylate endogecous substances, bilirubin and an uremic toxin, CMPF, on FSA"Pharmacentical Research.. 16・(6). 916-923 (1999)
[Publications] K. Yamasaki et al: "Interactive binding to the two principal ligand binding siteo of HSA: effect of the N-B transition"Biochimica Biophysica Acta. 1432. 313-323 (1999)
[Publications] V. T. G. Chuang et al: "Helix of subdomain IIIA of HSA is the region primainly photolabeled by ketoproten"Biochimica Biophysica Acta. 1434. 18-30 (1999)
[Publications] T. Sakai et al: "Stereoselective serum protein binding of ketoprofen in liver deseases"Enantiomer. 4・(5). 477-482 (1999)
[Publications] C. Kawasaki et al: "Charcoal hemoperfusion in the treatment of phenytoin onerdose"Americal Journul of Kidney Desease. 35(2). 323-326 (2000)
[Publications] Y. Tsutsumi: "Decreased bilirubin-binding capacity in uemic serum caused by an accumulation of furan dicerboxylic acid"Nephron. 84・(3)in press. (2000)
[Publications] 小田切優樹分担(永井恒司監修): "新・ドラッグデリバリーシステム"シーエムシ. 227 (2000)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

医学的有効性の向上を目的とした組換え型アルブミン製剤の設計と機能性評価

Principal Investigator

小田切 優樹 熊本大学, 薬学部, 教授 (80120145)

Research Products

[Publications] Y. Tsutsumi et al: "Interaction between two earboxylate endogecous substances, bilirubin and an uremic toxin, CMPF, on FSA"Pharmacentical Research.. 16・(6). 916-923 (1999)

[Publications] K. Yamasaki et al: "Interactive binding to the two principal ligand binding siteo of HSA: effect of the N-B transition"Biochimica Biophysica Acta. 1432. 313-323 (1999)

[Publications] V. T. G. Chuang et al: "Helix of subdomain IIIA of HSA is the region primainly photolabeled by ketoproten"Biochimica Biophysica Acta. 1434. 18-30 (1999)

[Publications] T. Sakai et al: "Stereoselective serum protein binding of ketoprofen in liver deseases"Enantiomer. 4・(5). 477-482 (1999)

[Publications] C. Kawasaki et al: "Charcoal hemoperfusion in the treatment of phenytoin onerdose"Americal Journul of Kidney Desease. 35(2). 323-326 (2000)

[Publications] Y. Tsutsumi: "Decreased bilirubin-binding capacity in uemic serum caused by an accumulation of furan dicerboxylic acid"Nephron. 84・(3)in press. (2000)

[Publications] 小田切優樹分担(永井恒司監修): "新・ドラッグデリバリーシステム"シーエムシ. 227 (2000)

小田切優樹熊本大学, 薬学部, 教授 (80120145)