1999 Fiscal Year Annual Research Report
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10558103
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
江崎 信芳 京都大学, 化学研究所, 教授 (50135597)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北畠 千嗣 ユニチカ株式会社, 中央研究所, 部長
吉村 徹 京都大学, 化学研究所, 助教授 (70182821)
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| Keywords | 有機塩素化合物 / 有機フッ素化合物 / クロロプロピオン酸 / フルオロ酢酸 / デハロゲナーゼ |
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| Research Abstract |
離分解性の有機ハロゲン化合物の分解を触媒する酵素の開発を目的として研究を実施した。離分解性のフルオロ酢酸を分解する細菌を土壌から単離し、本菌からフルオロ酢酸の加水分解的脱ハロゲン反応を触媒する酵素を単離した。本酵素はクロロ酢酸やブロモ酢酸には作用したが、炭素鎖長が3以上の基質には作用しなかった。一方、2-クロロプロピオン酸を炭素源とする倍地でスクリーニングを行い、湖水から分解菌を単離した。本菌から精製した酵素は2-クロロプロピオン酸のD-体、L-体のいずれにも作用し、これらの加水分解的脱ハロゲン反応を触媒した。また、種々のハロ酢酸の他、2-クロロプロピオン酢アミドにも作用し、これらの加水分解的脱ハロゲン反応を触媒した。精製酵素のアミノ末端配列、および内部アミノ酸配列を解析し、これに基づいて、PCRクローニング用のプライマーを設計した。ゲノムDNAを鋳型とするPCRで、本酵素遺伝子の断片を取得した。さらに、カセット法により、酵素全長をコードする遺伝子を単離した。全塩基配列を決定し、906塩基からなるORFの存在を明らかにした。推定される遺伝子産物は301アミノ酸残基からなり、推定分子量は34,049で、精製酵素の電気泳動によって求めた分子量と良く一致した。これらの酵素は、難分解性有機ハロゲン化合物の分解のみならず、有機ハロゲン化合物の変換による物質生産にも有用であると考えられる。
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