1999 Fiscal Year Annual Research Report
新型共焦点ビデオ顕微鏡の開発とグリアー神経交信の解析
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10558107
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
川戸 佳 東京大学, 大学院・総合文化研究科, 教授 (50169736)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田名網 健雄 横河電気, 開発プロジェクトセンター, 係長(研究職)
木本 哲也 東京大学, 大学院・総合文化研究科, 助手 (60292843)
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| Keywords | 共焦点ビデオ顕微鏡 / 対物レンズスキャン / 3次元分布 / 培養細胞 |
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| Research Abstract |
本年度は、対物レンズ垂直スキャン式のリアルタイム共焦点顕微鏡システムを構築した。これは、対物レンズを垂直方向にスキャンすることにより、共焦点断層像を垂直方向にリアルタイムで取得することを可能にするシステムである。基本構成は、ニポー円盤を回転させる形式の倒立型共焦点蛍光顕微鏡に、対物レンズをピエゾ素子により上下振動させる装置を組み込んだものである。本システムにより、100μmの厚みの領域を、毎秒最大5回スキャン(取得画像数は一秒あたり30枚)できる性能を実現した。
本年度はこのシステムで、Ca^<2+>感受性の蛍光色素結合デキストランをマイクロインジェクションしたアフリカツメガエルのアニマルキャップ細胞をリアルタイムで測定し、その三次元の蛍光強度の分布の可視化に成功した。この過程で本システムが目的とする現象を逃すことなく共焦点観察できるという利点を有することが確認された。また、タイムラプス方式の測定も可能なので、長期にわたる蛍光観察を行うことも可能である。
現在本システムを用いて、アクチビン刺激による分化に伴うアニマルキャップ細胞内のCa^<2+>信号の3次元的可視化を行うという課題に取り組んでいる。
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[Publications] Yamada,M.: "Dynamic mobility of genetically expressed fusion protein between cytochrome P4501A1 and NADPH-cytochrome P450 reductase in yeast microsomes"Biochemistry. 38. 9465-9470 (1999)
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[Publications] Suzuki-Tomii,K.: "Comparative experiments of protein denaturation for studying structural difference of homologous membrane proteins : P-450scc and P-45011β"Jpn.J.Appl.Phys.. 38. 298-301 (1999)
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[Publications] Ichikawa,T.: "Digital fluorescence imaging of trafficking of endosomes containing low density lipoprotein in brain astroglial cells"Biochem.Biophys.Res.Commun.. (in press). (2000)
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[Publications] Mukai,H.: "Effects of neurosteroids on Ca^<2+> signaling mediated by recombinant N-methy1-D-aspartate receptor expressed in Chinese hamster ovary cells"Neurosci.Lett.. (in press). (2000)
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[Publications] Kawato,S.: "Neurosteroides are 4th generation neuromessengers : cell biophysical analysis of steroid signal transduction"Adv.Biophys.. (in press). (2000)
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[Publications] Kawato,S.: "Localization and activities of neurosteroidogenic systems in the hippocampal neurons.in Molocular Steroidogenesis"Universal Academy Press. 4 (2000)
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[Publications] Takahashi,T.: "Corticosterone acutely prolonged NMDA receptor-mediated Ca^<2+>elevation in cultured rat hippocampal neurons.in Molocular Steroidogenesis"Universal Academy Press. 2 (2000)
