1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10640672
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
鈴木 龍夫 兵庫医科大学, 医学部, 助教授 (90068544)
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| Keywords | 細胞情報 / 光情報変換 / 視細胞 / ラプドーム / ロドプシン / GTP-結合蛋白 / ホスホリパーゼC |
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| Research Abstract |
1、 ロドプシン-q-PLC反応カスケードの再構成:イカ網膜から、ロドプシン・Gqαβγ・PLCを分離精製し、脂質ベジクルに組み込んで再構成した反応系を完成し、反応の最下流のPLCの活性が光とGTP存在で著しく増加することを確認した。今後、この再構成ロドプシン-Gq-PLC反応系を標準的なアッセイ系として用い、調節因子を調べてゆく。
2、 130kDa PLCと95kDaPLCの機能の差異:カルシウム依存性プロテアーゼにより130kDa PLCの触媒部位よりC末端側が1個所切断されて、95kDaPLCと35kDa断片が生じた。95kDaPLCはGqαにより岳性化を受けないが、Gqα存在下で濃度依存的に35kDa断片により活性化された。C末端側の35kDaペプタイドはこれ自身が調節ドメインであり、Gqαと結合して95kDa PLCを活性化することが分かった。PLC活性化には大過剰の35kDa断片が必要なことから、プロテアーゼによる切断はロドプシン-Gq-PLC反応カスケードの停止機構の一つであると考えられる。
3、 130kDa PLCの一次構造:イカ網膜cDNAから130kDaPLCのクローニングを行った。現在、約1100アミノ酸をコードする領域をカバーする一部重複した複数のクローンを得ている。これまで分かったl30kDa PLCと既に報告されている98kDa PLCを比較すると、後者は前者の一部が欠損し、前者にない配列が入って途中で終了していることが分かった。98kDa PLCには2、で述べた35kDaペプタイド部分がないので、Gqαにより活性化を受けない種類のものと考えられる。
4、 その他計画した研究に、C-キナーゼの同定と分離がある。C-キナーゼはRIを用いた実験を計画していたが、合成基質ペプチドと質量分析計を用いた方法に変更し、現在準備している。
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[Publications] Akihisa Terakita: "Light-regulated localization of the beta-subunit of Gq-type G-protein in the crayfish photoreceptors" Journal of Comparative Physiology A. 183. 411-417 (1998)
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[Publications] Tatsuo Suzuki: "Regulation of squid visual phospholipase C by activated Gprotein-alpha" Comparative Biochemistry and Physiology A. (印刷中). (1999)
