1999 Fiscal Year Annual Research Report

放線菌のDNA転移に関与する遺伝子発現制御機構の時間的・空間的解析

Research Project

Project/Area Number	10660093
Research Institution	KYUSHU UNIVERSITY
Principal Investigator	土居克実九州大学, 農学部, 講師 (40253520)
Keywords	Streptomyces azureus / Streptomyces lividans TK24 / gene dosage / EGFP融合タンパク質 / プラスミド / 位相差蛍光顕微鏡 / His-tag / 胞子形成阻害
Research Abstract	放線菌のDNA転移に関与する遺伝子発現制御機構の時間的・空間的解析を行うため、Streptomyces azureusのプラスミドpSA1.1上の宿主胞子形成阻害とプラスミド転移に機能するspiの発現について研究を進めた。まず、spiプロモーターを含み、C末端側に6個のHisをコードするようにしたspi-his・tag遺伝子を増幅し、pUC118にクローニングした。組換え大腸菌中で発現を試みたところ、可溶性画分にはバンドが認められず、不溶性画分に約50kDaのバンドが認められた。従って、目的のSpi-His-tagタンパク質は細胞膜に局在すると推定した。次に、作製したspi-his-tag遺伝子を放線菌の高コピーベクターpIJ702と低コピーベクターpRES18にそれぞれ挿入した。これらをStreptomyces lividans TK24株、およびpSA1.1を保持したTK24株に形質転換し、それぞれの生育を検したところ、液体培養ではTK24(pRES18(spi-his-tag)+pSA1.1)の生育が最も良好で、TK24(pIJ702(spi-his-tag))の生育が最も遅かった。固体培地上ではTK24(pRES18(spi-his-tag)+pSA1.1)とTK24(pRES18(spi-his-tag))に差異が認められなかったが、TK24(pIJ702(spi-his-tag))やTK24(pIJ702(spi-his-tag)+pSA1.1)の増殖は上記の2菌株に較べ遅いことが示された。これは、spiが高コピー数発現したために生じた宿主に対する胞子形成阻害と考えられた。さらに、spiとEGFPの融合遺伝子をを作製し、pRES18にクローニング後、TK24株に形質転換した。固体培養菌体の蛍光顕微鏡観察を行ったところ、蛍光が培養2日目の菌体のほぼ全域から検出された。よって、spiは固体培養では、早期に菌糸全域で発現していることが分かった。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] K.Doi, et al.: "Whole Sequence of spoIIIE-Like, Sporulation-inhibitory, and Transfer Gene(spi) in a Conjugative Plasmid, pSA1.1, of Streptomyces azureus and Detection of spi-Like Gene in the Actinomycete Chromosome"Biosci. Biotech. Biochem.,. 62(8),. 1597-1600 (1998)
[Publications] 土居克実他: "「放線菌の接合性プラスミド」"生物工学会誌,. 76,(2),. 66-71 (1998)
[Publications] 土居克実他: "サイレージ乳酸菌の機能開発 -サイレージ発酵に適合した有用特性の探索-"日本生物工学会誌,. 76,(11),. 455-457 (1998)
[Publications] F.Inagaki, K.Doi et al.: "Bio-deposition of Amorphous Silica by an Extremely Thermophilic Bacterium,Thermus spp."Biosci. Biotech. Biochem.,. 62(6). 1271-1272 (1998)
[Publications] E.Yokoyama et al.: "Gene encoding a replication initiator protein and replication origin of conjugative plasmid pSA1.1 of Streptomyces cyaneus ATCC14921"FEMS Microbiol. Lett.,. 169. 103-109 (1998)
[Publications] 土居克実他: "サイレージ乳酸菌の機能開発:高温環境に適応したバクテリオシン生産株の分離と利用"日本生物工学会誌,. 77,(11),. 472-474 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

放線菌のDNA転移に関与する遺伝子発現制御機構の時間的・空間的解析

Principal Investigator

土居 克実 九州大学, 農学部, 講師 (40253520)

Research Products

[Publications] K.Doi, et al.: "Whole Sequence of spoIIIE-Like, Sporulation-inhibitory, and Transfer Gene(spi) in a Conjugative Plasmid, pSA1.1, of Streptomyces azureus and Detection of spi-Like Gene in the Actinomycete Chromosome"Biosci. Biotech. Biochem.,. 62(8),. 1597-1600 (1998)

[Publications] 土居克実 他: "「放線菌の接合性プラスミド」"生物工学会誌,. 76,(2),. 66-71 (1998)

[Publications] 土居克実 他: "サイレージ乳酸菌の機能開発 -サイレージ発酵に適合した有用特性の探索-"日本生物工学会誌,. 76,(11),. 455-457 (1998)

[Publications] F.Inagaki, K.Doi et al.: "Bio-deposition of Amorphous Silica by an Extremely Thermophilic Bacterium,Thermus spp."Biosci. Biotech. Biochem.,. 62(6). 1271-1272 (1998)

[Publications] E.Yokoyama et al.: "Gene encoding a replication initiator protein and replication origin of conjugative plasmid pSA1.1 of Streptomyces cyaneus ATCC14921"FEMS Microbiol. Lett.,. 169. 103-109 (1998)

[Publications] 土居克実 他: "サイレージ乳酸菌の機能開発:高温環境に適応したバクテリオシン生産株の分離と利用"日本生物工学会誌,. 77,(11),. 472-474 (1999)

土居克実九州大学, 農学部, 講師 (40253520)

[Publications] 土居克実他: "「放線菌の接合性プラスミド」"生物工学会誌,. 76,(2),. 66-71 (1998)

[Publications] 土居克実他: "サイレージ乳酸菌の機能開発 -サイレージ発酵に適合した有用特性の探索-"日本生物工学会誌,. 76,(11),. 455-457 (1998)

[Publications] 土居克実他: "サイレージ乳酸菌の機能開発:高温環境に適応したバクテリオシン生産株の分離と利用"日本生物工学会誌,. 77,(11),. 472-474 (1999)