1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10660194
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
松居 隆 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 講師 (90011981)
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| Keywords | テトロドトキシン / フグ毒 / クサフグ / TTX結合タンパク質 / 毒化機構 |
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| Research Abstract |
1. 無毒養殖クサフグおよびトラフグを親魚として人工受精、孵化、稚魚の飼育などフグを養殖し定期的に毒性をチェックするとともに常時実験に使用する養殖フグを確保した。
2. 筆者らが開発したTTX結合活性測定法を使用し、クサフグ血漿を試料にTTX結合タンパク質を精製単離した。クサフグ血漿を20mM phosphate buffer,pH7.2で10倍量に希釈し、DEAE-celluloseを加えタンパク質を吸着させた後、250mM NaClを含むP.bufferで活性画分を溶出した。この画分の硫安35-65%飽和沈殿画分を集め、透析後Sephadex G-100次いでSephadex G-200ゲル濾過に付し活性画分を得た。さらにSephacryl S-200およびCellulofine A-500カラムクロマトグラフィーにより精製し、最終的には二連に繋いだT SK G-3000SLカラムによるHPLCにより活性タンパク質を単離した。この間タンパク質の純度は7%ゲルのPAGEおよびSDS-PAGEにより検定し、最終標品は電気泳動的に単一と認められた。SDS-PAGEより求めた分子量は116,000であり,TOF mass spectrometerにより求めた分子量は91,000とほぼ似た値が得られた。本タンパク質のアミノ末端のシークエンスはプロテインシークエンサーによる分析によりAla-Pro-Ser-Pro-?-?-?-His-?-Leu-Thr-Lys-Pro-Val-と同定された。
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