1999 Fiscal Year Annual Research Report
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10670024
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
澤田 元 横浜市立大学, 医学部, 教授 (90101112)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
尾野 道男 横浜市立大学, 医学部, 助手 (50264601)
矢間 太 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00254160)
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| Keywords | 精祖細胞 / 幹細胞 / telomerase / W / Wvマウス / 精子形成 / subtractive cDNA cloning / in situ hybridization |
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| Research Abstract |
3つのプロジェクトを行った。
1つは精祖細胞をエリュトリエーターとセルソーターにて分離し、精祖細胞のフラクション(1)とPachytene期の精母細胞のフラクション(2)を得、前者より得たcDNAより後者から得たcDNAをsubtractし、得られた精祖細胞にのみ存在するcDNAの性質を調べることである。この方法にて約20のcDNAクローンを分離、その性質について現在解析中である。
2つめは正常マウスの精巣cDNAより、精子系細胞を欠損したW/Wv変異マウスのcDNAをsubtractし、得られた精子系細胞にのみ存在するcDNAの種類と性質を調べることである。これを精祖細胞しか分化発生していない生後5日令のマウスについて行えば、精祖細胞に発現している遺伝子のcDNAのみを得ることができる。この方法で未知の遺伝子を22種、既知の遺伝子を30種クローニングした。未知クローンのうち、2つは理研の完全長cDNAライブラリーに同一と思われるものがあり、クローン供与を受けた。うち1つはIn situ hybridizationで精祖細胞をはじめ、小腸陰窩など幹細胞と関連のある領域に発現していた。現在、培養細胞での強制発現など機能解析を行っている。また、既知のもののうち、その機能に興味のもたれる複数のクローン(NDPK-B、MCT-3など)についてもin situ hybridizationなど解析を行っている。
3つめは幹細胞の機能と関係
があることが他の臓器のデータや分子生物学などから推定されている遺伝子の局在をIn situ hybridizationで調べることである。Telomerase、Oct-3/4、Notch-1、2、3、Deltaなどについてin situ hybridizaitonを行い、telomeraseが精祖細胞と思われる細胞に強く反応が出るなど、ある程度の成果を得ている。
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[Publications] Sawada,H.,Esaki,M.: "A simple flat embedding method for the correlative light and electron microscopic immunocytochemistry."J.Electr.Microsc.. 47. 535-537 (1998)
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[Publications] Kadonosono,K.,Ito,N.,Yazama,F.,Nishide,T.,Sugita,M.,Sawada,H.,Ohno,S.: "Effect of intracameral anesthesia on the corneal endothelium."J.Cataract.Refract.Surg.. 24. 1377-1381 (1998)
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[Publications] Kadonosono,K.,Yazama,F.,Ito,N.,Sawada,H.,Ohno,S.: "Expression of matrix metalloproteinase-7 in choroidal neovascular membnrases in age-related macular degeneration."Amer.J.Ophthalmol.. 128. 382-384 (1999)
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[Publications] Yoshida,K.,Ono,M.Sawada,H.: "Lipopolysaccharide-induced vacuoles in macrophages:their origin is plasma membrane-derived organelles and endoplasmic reticulum,but not lysosomes."J.Endotoxin Res.. 5. 1-28 (1999)
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[Publications] xSawada,H.,Esaki,M.: "A practical technique to postfix the nanogold-immunolabeied specimens with osmium and embed them in Epon for electron microscopy."J.Histochem.Cytochem.. 48. 1-6 (2000)
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[Publications] 沢田 元 安達栄治郎(分担執筆): "細胞外マトリックス-基礎と臨床-"愛智出版. 39 (2000)
