1998 Fiscal Year Annual Research Report
転写調節因子を介する遺伝子発現制御機構の直視下解析
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10670034
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
渡辺 淳 関西医科大学, 医学部, 助教授 (40148557)
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| Keywords | アリルハイドロカーボン受容体 / DNA / DNA転写調節因子 / CYPIA / 生物発光 / 原子間力顕微鏡 |
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| Research Abstract |
1. メチルコラントレン(MC)を投与したラット肝から得たアリルハイドロカーボン受容体(AhR)とAhR/Amt複合体および人工合成したXREフラグメントを等方性カーボングラファイト基板に固着させ、原子間力顕微鏡(AFM)で観察して構造を比較した。ArntはAhRのbHLH domalm相当領域に結合し、XREはAmlのend(おそらくN末側)に結合した。また、AhR/Arnt複合体がXREの片方のDNA鎖だけに結合することを示唆する結果が得られた。(交付申請書記載の研究実施計画1および2項に対応)。2. MC投与ラット肝の切片および培養H4-IIE細胞におけるAR/Amt複合体を蛍光標識XREプローブを用いて共焦点レーザー顕微鏡で観察し、AhR/Arnt複合体が細胞質では形成されないことを明らかにした。次に、XREプローブ-高感度ルミノール発光系を導入した生物発光解析システムを用いて高精度フォトンヵウンティングを行なった結果、AhR/Arnt複合体の形成・解離部位が核の辺縁部であることが明らかとなった。現在、HSP90の解離部位について解析中である(交付申請書記載の研究実施計画3項に対応)。3. 肝CDNAライブラリからクローニングしPCRで増幅したCYPlAl cDNAの断片をプローブとして肝細胞gcnomicDNAをスクリーニングし、XREを含む5'flanking領域を制限酵素で切り出した。こうして得られたフラグメントとAhRを固着させた基板とを反応させ、Ah受容体のXREへの結合に果たすDNA高次構造の役割の解析を開始した(交付申請書記載の研究実施針画5および6項に対応)。
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[Publications] Mino K: "Effect of 3-methylcholanthrene administration on expression of cytochrome P-450 isoforms induced by phenobarbital in rat hepatocytes" J Histochem Cytochem. 46. 1151-1160 (1998)
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[Publications] Watanabe J: "Determination of accuracy of quantitative immunohistochemical results with an antigen-immobilized filter model system." Acta Anat Nippon. 73. 25-31 (1998)
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[Publications] Asaka Y: "Localization of xenobiotic responsive element-binding protein in rat hepatocyte nuclei after methylcholanthrene administration as revealed by in situ Southwestern hybridization." J Histochem Cytochem. 46. 825-832 (1998)
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[Publications] Shibano K: "Culture of stromal cells derived from medullary cavity of human long bone in the presence of 1,25-dihydroxyvitamin D3,recombinant human bone morphogenetic protein-2 or ipriflavone." Bone. 22. 251-258 (1998)
