1999 Fiscal Year Annual Research Report
神経系由来培養細胞におけるテトラヒドロビオプテリン生合成調節機構の解析
| Project/Area Number |
10670050
|
|---|
| Research Institution | Fujita Health University |
|---|
Principal Investigator |
太田 明 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (10247637)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森 啓至 藤田保健衛生大学, 医学部, 助手 (40239596)
中島 昭 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (20180276)
|
|---|
| Keywords | リポポリサッカライド受容体 / N1E-115細胞 / CD14 / CD18 / Toll-like receptor / IκB / IκBキナーゼ / 腫瘍壊死因子-α |
|---|
| Research Abstract |
#1.神経系由来培養細胞におけるリポポリサッカライド(LPS)受容体の検索
マウス神経芽細胞腫N1E-115細胞においてはリポポリサツカライド(LPS)の刺激によりテトラヒドロビオプテリン(BH4)生合成が促進することを我々は既に証明している。このLPS刺激を細胞内へ伝達するための必須の構成要素であるLPS受容体を、この神経系由来培養細胞において検索した。マクロファージ(Mφ)においてはCD14がLPS受容体として機能しているが、N1E-115細胞においてはCD14に特異的なプローべを用いてreverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)を施行するも、然るべきCD14のバンドの出現は確認されず、代わりにMφにおけるLPS受容体の亜型であるCD18のバンドが確認された。また、近年、CD14と共役するToll-like receptor(Tlr)が免疫系細胞及び組織にて同定され、そのmRNAの発現が証明されたが、N1E-115細胞においてもTlr type4(Tlr-4)をコードするmRNAの特異的バンドがRT-PCRにて確認された。神経系由来培養細胞におけるTlr-4の確認は世界で初めてであり、現在、N1E-115細胞におけるTlr-4の発現の調節機構を検討中である。
#2.N1E-115細胞におけるLPS刺激よりIκB活性化に至る道筋の解明
LPS受容体(CD14/Tlr)よりIκBのリン酸化に至る過程には多くの機能調節分子が介在しており、これら機能分子群のmRNA発現を確認する作業を現在継続中である。特にN1E-115細胞におけるIκBキナーゼの機能調節に焦点を当てて検討中である。
#3.腫瘍壊死因子-α(TNFーα)刺激とCD14/Tlr系の機能相関に関する検討
昨年、N1E-115細胞をTNF-αにて刺激することにより細胞内BH4含有量が増大することをこの欄にて報告したが、TNF-α刺激により活性化される系とLPS刺激によりCD14/Tlrを起動する系との関連性をN1E-115細胞にて検討中である。
|
-
[Publications] Nakashima A et al.: "Positive charge intrinsic to Arg37-Arg38 is critical for dopamine inhibition of the catalytic activity of human tyrosine hydroxylase type 1"FEBS Letters. 465・1. 59-63 (2000)
-
[Publications] Nakashima A et al.: "Expression of human tyrosine hydroxylase type I in Escherichia coli as a protease-cleavable fusion protein. Short communication"Journal of Neural Transmission. 106・9/10. 819-824 (1999)
-
[Publications] Nakashima A et al.: "Dopamine inhibition of human tyrosine hydroxylase type 1 is controlled by the specific portion in the N-terminus of the enzyme"Journal of Neurochemistry. 72・5. 2145-215* (1999)
-
[Publications] Ota M et al.: "Risperidone, an atypical antipsychotic, affects the mRNA expressions of monoamine oxidase type B vesicular monoamine transporter-2 in rat brain"Biogenic Amines. 15・2. 197-216 (1999)
-
[Publications] Nomura T et al.: "Enzymes related to catecholamine biosynthesis in Tetrahymena pyriformis. Presence of GTP cyclohydrolase I"Comparative Biochemistry and Physiology. 120B・4. 753-760 (1998)
