下垂体前葉細胞の増殖調節に関する細胞内情報伝達経路の解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670060
• Research Institution: Yamanashi Medical University
• Principal Investigator: 有田 順 山梨医科大学, 医学部, 教授 (80128587)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山川 耕司 山梨医科大学, 医学部, 助手 (90293472)
• Keywords: 下垂体前葉 / 細胞増殖 / サイクリックAMP / MAPキナーゼ / CREB

Research Abstract

プロラクチン産生(PRL)細胞においてcyclic AMPがMAP kinase cascadeを活性化するのか、また、その下流に存在すると考えられるcyclic AMP-response element binding protein(CREB)を活性化するのかを免疫組織化学的方法を用いて調べた。さらに、これらの蛋白のさらに下流に存在するp70S6kがPRL細胞の増殖調節に関与するかも調べた。
【研究結果】
1 MAP kinase cascadeの最終構成酵素であるMAP kinase(Erk 1)の活性化を見るために、この蛋白のリン酸化を識別する抗体を用いて、プロラクチンとの蛍光2重免疫染色を行った。リン酸化MAP kinase(pMAP kinase)はNew England BioLabs社の抗体を用い、Tyramide Signal Amplification法によって免疫染色した。培養下垂体前葉細胞には、PRL及びpMAP kinase免疫陽性細胞が認められたが、これらの細胞の数は、insulinあるいはinsulin-like growth factor-1投与によっても変化せず、さらにdibutyryl cyclic AMPやforskolin投与によっても影響を受けなかった。
2 MAP kinaseと同様の方法によって、リン酸化CREB(pCREB)の免疫染色を行った。PRL及びpCREB免疫陽性細胞の数は、dibutyryl cyclic AMP及びforskolin投与によって増加しただけではなく、insulin-like growth factor-1投与によっても増加した。
3 p70S6kの選択的阻害剤であるrapamycin投与は、insulinあるいはforskolinによるPRL細胞の増殖を抑制した。また、生理学的に重要なPRL細胞の増殖調節因子であるestradiolの増殖促進作用も抑制した。一方、PRL細胞の増殖を抑制するドーパミンアゴニストであるbromocriptine存在下では、rapamycinはinsulinによる増殖は抑制したが、forskolinによる増殖を抑制できなかった。

Research Products

• [Publications] S. Suzuki: "Mitogen-activated protein kinase-dependent stimulation of proliferation of rat lactotrophs in culture by cyclic AMP"Endocrinology. 140(6). 2850-2858 (1999)
• [Publications] K. Yamakawa: "Distribution of prolactin-releasing peptide-immunoreactive neurons in the rat hypothalamus"Neuroscience Letters. 267. 113-116 (1999)
• [Publications] A. Hashi: "Stimulatory action of insulin-like growth factor-1 on lactotroph proliferation in culture"The Japanse Journal of Physiology. 49.suppl.(in press). (1999)
• [Publications] 川嶋健吾: "プロラクチン産生細胞の増殖調節におけるPI3-kinaseおよびp70S6kの関与"日本内分泌学会雑誌. 75(2). 330 (1999)