1998 Fiscal Year Annual Research Report
ジーンターゲティング法を用いたα1アドレナリン受容体の機能解析
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10670106
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| Research Institution | National Research Institute for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
田上 昭人 国立小児病院, 小児医療研究センター・小児薬理研究部, 室長 (60301800)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤木 夏子 国立小児病院, 小児医療研究センター・小児薬理研究部, 共同研究員
辻本 豪三 国立小児病院, 小児医療研究センター・小児薬理研究部, 部長 (80172013)
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| Keywords | α1アドレナリン受容体 / α1Dアドレナリン受容体 / ノックアウト / ジーンターゲティング / キメラマウス / マウス未分化胚細胞 / ヘテロ接合体 / ホモ接合体 |
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| Research Abstract |
α1アドレナリン受容体のうち、生理機能が明らかになっていないα1Dアドレナリン受容体について、マウス未分化胚細胞を用いたジーンターゲティング法を用いて受容体の変異体を持つマウスの作成を行い、この変異動物を解析し、受容体の生理機能、薬物の選択性を明らかにすることを目的どして研究をおこなった。遺伝子ライブラリーのスクリーニングの結果、2個の陽性クローンが得られ、マウスα1d-アドレナリン受容体遺伝子は、10kb以上の大きさからなり、2個のエクソンおよび1個のイントロンから構成されていることが明らかになった。イントロンは他のα1アドレナリン受容体と同様に第6膜貫通領域をコードする領域に存在した。ターゲティングベクターの作製を行い、このターゲティングベクターを用いたES細胞への遺伝子導入およびG418薬剤によるスクリーニングにて、相同組み換えをおこし、マウスα 1dアドレナリン受容体遺伝子の第1エクソン内の開始コドンを含む約300bpの部位がネオマイシン耐性遺伝子に置き換わる細胞のクローニングを行った。その結果、相同組み換えを正確におこした3個のES細胞がクローニングされた。これらの細胞を用いてマウスの胚盤胞に細胞導入を行い、キメラマウスが得られた。さらにこれらのキメラマウスよりFlマウスが作製された。今後これらのFlマウスを用いてヘテロ接合体、ホモ接合体の作成を行い解析を進める予定である。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Tsujimoto G,Hirasawa A,Sugawara T,Awaji T.: "Subtype-specific differences in subcellular localization and chlorethylclonidine in activation of α1-adrenoceptors." Life Sciences.62(17/18). 1567-1571 (1998)
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[Publications] Nasu K,Moriyama N,Fukazawa R,Tsujimoto G,Tanaka T,et al.: "Quantification and distribution of α1-adrenoceptor subtype mRNAs in male and female human posterior urethra." Br.J.Pharmacol.123. 1289-1293 (1998)
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[Publications] Shibata K,Hirasawa A,Foglar R,Ogawa S,Tsujimoto G: "Effects of Quinidine and Verapamil on human cardiovascular α1-adrenoceoptors." Circulation. 97. 1227-1230 (1998)
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[Publications] Take H,Shibata K,Hirasawa A,Takada T,Tsujimoto G,et al.: "Vasacular α1-adrenoceptor subtype selectivity and α1-blocker-induced orthostatic hypotension." Jpn.J.Pharmacol.77. 61-70 (1998)
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[Publications] Hirasawa A,Awaji T,Sugawara T,Tsujimoto A,Tsujimoto G: "Differential mechanism for the cell surface sorting and the agonist-promoted internalization of α1B-adrenoceptor." Br.J.Pharmacol.124. 55-62 (1998)
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[Publications] Takei Y,Tsujimoto G.: "Identification of a Novel MCM3-associated Protein that Facilitates MCM3 Nuclear Localization" J.Biol.Chem.273(35). 22177-22180 (1998)
