1999 Fiscal Year Annual Research Report
初代培養細胞における癌化抑制に関与する遺伝子のクローニングと機能解析
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10670205
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
井上 寛一 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30176440)
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| Keywords | 初代培養細胞 / がん抑制遺伝子 / がん遺伝子 |
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| Research Abstract |
1.drs遺伝子の機能解析
我々が分離したv-srcによるトランスフォーメーションを抑制する活性を持つ新規癌抑制遺伝子drsはヒト癌細胞株においてもサイクリンAの発現抑制を介して足場非依存性増殖を抑制する。またこの抑制活性にはdrsの膜貫通領域の外側の3つのconsensus repeatと内側の両方の領域が必要であることをこれまでに明らかにしてきた。この1年間我々はdrs遺伝子の機能と癌発生における役割を解析し以下の結果を得た。
1.ヒト正常大腸、良性および悪性の大腸腺癌組織におけるdrs遺伝子の発現を調べ、良性のadenomaから悪性のadenocarcinomaへの移行の過程でdrs遺伝子のmRNA発現が抑制されていることを見い出した。
2.抗Drs抗体と種々のdeletion mutantを用いてDrs蛋白が細胞膜上でconsensus repeat領域を外側にして膜貫通領域で互いに会合しており燐酸化はされていないことを明らかにした。
3.2種類のmouse drs cDNA cloneとknockout(KO) mouse作製のためのmouse genomic cloneを分離した。
II.REF特異的に発現している遺伝子群のクローニングとその機能解析
REF細胞で特異的に発現している遺伝子群のクローニングをcDNAサブトラクション法によって試み、REFで発現が認められ株化細胞F2408で発現が著しく減少しているcDNAクローンを20クローン分離している。これらのcDNA群の中でlumican遺伝子がv-src癌遺伝子による癌化を抑制する活性があることを明らかにしてきたが我々はさらにlumicanが肺癌などのヒト癌細胞株でも発現が抑制されておりlumicanをこれらの癌細胞に導入するとp21CDK inhibitorの発現上昇とともに癌化形質を抑制することを見い出した。
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[Publications] A.Yamashita et al.: "Suppression of anchorage-independent growth of human cancer cell lines by the drs gene"Oncogene. 18. 4777-4787 (1999)
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[Publications] S.Kyo et al.: "Expression of human telomerase subunits in ovarian malignant, borderline, and benign tumors"Int.J.Cancer.. 80. 804-809 (1999)
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[Publications] N.Yoshioka et al.: "Isolation of transformation suppressor genes by cDNA subtraction: Lumican suppresses transformation by v-src and v-K-ras"J.Virol.. 74. 1008-1013 (2000)
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[Publications] M.Shimakage et al.: "Downregulation of drs mRNA in human colon adeno carcinomas"Int.J.Cancer. (in press).
