1999 Fiscal Year Annual Research Report

吸血性昆虫由来のNO合成酵素NOキャリアー蛋白の性状および構造の解析

Research Project

Project/Area Number	10670227
Research Institution	Mie University
Principal Investigator	油田正夫三重大学, 医学部, 助手 (90293779)
Keywords	血液凝固 / インヒビター / オオサシガメ / ファクターIX / プロリクシンS
Research Abstract	オオサシガメ唾液線由来の血液凝固インヒビター、プロリクシンS、をバキュロウイルスをもちいて昆虫細胞で大量発現させた。この組み替え蛋白を用いて種々の凝固因子との結合実験、再構成系での酵素活性阻害実験をおこない、プロリクシンSの凝固阻害機構をほぼ完全に解明することができた。1、プロリクシンSは凝固第IX因子および活性化後のIXa因子に特異的に結合する。2、この結合には生理的濃度のカルシウムイオンの存在が必須である。3、プロリクシンSの凝固第IX因子への結合は、XIa因子及びVIIa/組織因子/リン脂質複合体による活性化を阻害する。4、IXa因子へのプロリクシンSの結合はリン脂質への結合を阻害し、これによりIXa/VIIIa/リン脂質複合体(Xase complex)の形成が阻害される。以上の結果(3、4)よりプロリクシンSは内因系凝固ばかりでなく外因系凝固も同時に阻害することが新たに明らかになった。5、IX因子から細胞膜結合部位であるGlaドメインを除くとプロリクシンSが結合できなくなった。このことより、プロリクシンSの結合部位がGlaドメインであり、カルシウムイオンの結合によるこのドメインの構造変化を認識して結合することが推測された。今後、プロリクシンS/Glaドメイン複合体を結晶化する予定である。すでにGlaドメインを化学合成した。これとバキュロウイルスをもちいて大量発現させたプロリクシンSを用いてプロリクシンSの構造と機能のさらに詳しい解明をおこないたい。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] P.Waidhet et al.: "Purification and characterization of a thrombin inhibitor from the salivary glands of a malarian vector mosquito,Anopheles stephensi"Biochem.Biophy.Acta.. 1381. 227-233 (1999)
[Publications] Jianxin Sun et al.: "Characterization and cDNA cloning of a hemoprotein in the salivary glands of the blood-sucking insect,Rhodnius prolixus"Insect Biochem.Mol.Biol.. 28. 191-200 (1999)
[Publications] Yuji Kaneko et al.: "Kinetic analysis on nitric oxide binding of recombinant Prolixin-S,a nitric oxide transport protein from the bug,Rhodnius prolixus"Biochemica et Biophysica Acta.. 1431. 492-499 (1999)
[Publications] Jianxin Sun et al.: "Changes in salivary gland proteins during blood feeding in Rhodnius prolixus,and dynamics of antibodies specific to salivary antigens"Med.Entomol.Zool.. 50. 41-50 (1999)
[Publications] Yuji Kaneko et al.: "Effects of recombinant nitrophorin-2 nitric oxide comples on vascular smooth muscle"Biosci.Biotech.Biochem.,. 63. 1488-1490 (1999)
[Publications] Haruhiko Isawa et al.: "The insect salivary protein,prolixin-S,inhibits factor Ixa generation and Xase complex formation in the blood coagulation pathway"J.Biol.Chem.. 275. 6636-6641 (2000)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

吸血性昆虫由来のNO合成酵素NOキャリアー蛋白の性状および構造の解析

Principal Investigator

油田 正夫 三重大学, 医学部, 助手 (90293779)

Research Products

[Publications] P.Waidhet et al.: "Purification and characterization of a thrombin inhibitor from the salivary glands of a malarian vector mosquito,Anopheles stephensi"Biochem.Biophy.Acta.. 1381. 227-233 (1999)

[Publications] Jianxin Sun et al.: "Characterization and cDNA cloning of a hemoprotein in the salivary glands of the blood-sucking insect,Rhodnius prolixus"Insect Biochem.Mol.Biol.. 28. 191-200 (1999)

[Publications] Yuji Kaneko et al.: "Kinetic analysis on nitric oxide binding of recombinant Prolixin-S,a nitric oxide transport protein from the bug,Rhodnius prolixus"Biochemica et Biophysica Acta.. 1431. 492-499 (1999)

[Publications] Jianxin Sun et al.: "Changes in salivary gland proteins during blood feeding in Rhodnius prolixus,and dynamics of antibodies specific to salivary antigens"Med.Entomol.Zool.. 50. 41-50 (1999)

[Publications] Yuji Kaneko et al.: "Effects of recombinant nitrophorin-2 nitric oxide comples on vascular smooth muscle"Biosci.Biotech.Biochem.,. 63. 1488-1490 (1999)

[Publications] Haruhiko Isawa et al.: "The insect salivary protein,prolixin-S,inhibits factor Ixa generation and Xase complex formation in the blood coagulation pathway"J.Biol.Chem.. 275. 6636-6641 (2000)

油田正夫三重大学, 医学部, 助手 (90293779)