2000 Fiscal Year Annual Research Report
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10670263
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| Research Institution | University of the Ryukyus |
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Principal Investigator |
仲宗根 昇 琉球大学, 医学部, 助手 (80175497)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
本馬 恭子 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90253955)
岩永 正明 琉球大学, 医学部, 教授 (00112384)
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| Keywords | コレラ菌 / 定着因子 / LPS糖鎖 / 外膜蛋白 |
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| Research Abstract |
コレラ菌の接着因子と防御抗原を解明するため、本年度は、in vivoで発現している外膜蛋白に焦点をあて、検討した。
El Tor型コレラ菌82P7株を、ウサギ腸管に接種し、in vivoのコレラ菌を得た。X-pressで菌体を破壊後、内膜をN-Lauroyl sarcosineで除き、超遠心処理で外膜(OM)を調整した。ハートインフュージョンブロスおよびLBブロスで培養した82P7株の外膜も同様にして調整した。両OMをSDS-電気泳動にかけ、外膜蛋白(Omp)の違いを検討した。分子量約17kDaの蛋白は、in vivoのOMにあって、in vitroにないOmpの中で最も大きな違いが出た。この蛋白(P7Rと命名)は、抗コレラ菌線毛(MSHA,TCP)抗体、抗OmpU抗体、抗コレラ毒素抗体に反応しなかった。また、コレラ患者血清に強く反応し、コントロールの健康人血清には反応しなかった。電気泳動後P7Rバンドを切り取り、アミノ酸配列を調べた結果は、AEILKSDAGTVDFYEQLRであった。アミノ酸相同検索を行ったところ、V.cholerae O1 OmpTと94%の相同性があった。ゲルバンドを切り取り、これをウサギに接種して抗P7R抗体を得た。抗P7R抗体をOmpU,OmpT,OmpAと反応させたところ、OmpTに反応した。この抗体の殺菌活性を測定したが、82P7株に対し64倍、Classicalの86B3株に対し8倍の活性を示し、殺菌抗体能は弱いことが確認された。さらにMASK法により菌の腸管付着阻止能を調べたが、著しい阻止能力は示さなかった。以上の結果から、P7Rは、その機能については不明のままだが、コレラ患者血清がこの蛋白を認識していることからコレラ菌の病原性になんらかの関与をしていると思われた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Noboru Nakasone: "A filamentous phage of Vibrio parahaemolyticus O3:K6 isolated in Laos"Microbiol.Immunol.. 43(4). 385-388 (1999)
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[Publications] Mika Enami: "Expression of type I pili is abolisyed in verotoxin-producing Escherichia coli O157"FEMS microbiol lett. 179. 467-472 (1999)
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[Publications] Yasuko Honma: "Effect of erythromycin on Shigella infection of Caco-2 cells."FEMS Immunology and Medical Microbiology. 27. 139-145 (2000)
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[Publications] Masaaki Iwanaga: "Tetracycline resistant and polymyxin B sensitive Vibrio cholerae O1 El Tor isolated from the recent epidemics."Jpn.J.Trop.Med.Hyg.. 28(1). 15-18 (2000)
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[Publications] Kouji Kawakami: "Cloning sequencing and expression of the gene encoding the extracellular metalloprotease of Aeromonas caviae."Microbiol.Immunol.. 44(5). 341-347 (2000)
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[Publications] Misako Aoyama: "Sequence of the gene encoding an alkaline serine protease of Bacillus pumilus TYO-67."Microbiol.Immunol.. 44(5). 389-393 (2000)
