1999 Fiscal Year Annual Research Report
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10670275
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| Research Institution | Tokushima Bunri University |
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Principal Investigator |
永浜 政博 徳島文理大学, 薬学部, 助教授 (40164462)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 敬子 徳島文理大学, 薬学部, 助手 (90170315)
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| Keywords | ホスフォリパーゼC / ウェルシュ菌 / ビフェルメンタンス菌 / セレウス菌 / 溶血 / ハイブリッド酵素 |
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| Research Abstract |
細菌性ホスフォリパーゼC(PLC)の構造と機能を明らかにするため、ウエルシュ菌α毒素(370残基)のN-domain(Ncp,250残基)とC-domain(Ccp,120残基)、ビフェルメンタンス菌PLC(CbPLC,372残基)のN-domain(Ncb,250残基)とC-domain(Ccb,122残基)、そして、セレウス菌PLC(BcPLC)のN-domain(Nbc,245残基)を組み合わせたNcpCcb、NcbCcp、NbcCcp,NbcCcbのハイブリッドPLCを作製した。Ncpは、α毒素の4%のPLC活性を有していたが、溶血活性は示さなかった。NcpCcbのPLC活性は、α毒素より低くNcpより高かった。NcpCcbの溶血活性は、ヒツジとウサギの各赤血球に対してα毒素の約0.5と30%であった。CbPLCのPLC活性は、α毒素の約10%で溶血活性はほとんど示さなかった。一方、NcbCcpの溶血とPLC活性はα毒素と同様の活性を有していた。NbcCcpはウサギ赤血球に対して溶血を示したが、ヒツジ赤血球に対しては示さなかった。しかしながら、BcPLCとNbcCcbは、溶血活性を全く示さなかった。さらに、赤血球膜への結合を検討したところ、NcbCcpとNbcCcpは、強く結合したが、CbPLCとNbcCcbは弱く結合し、NcpとBcPLCは結合しなかった。以上の結果から、α毒素のC-domainは、細胞膜への結合とN-domainの酵素活性に重要であると考えられる。
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[Publications] 永浜政博: "Mechanism of membrane dumge by Clostridium perfringens alpha-toxin"Microbiol,Immunol.. 42(8). 533-538 (1998)
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[Publications] 永浜政博: "Clostridium perfringens β-toxin is sensitive to thiol group modification but does not require a thiol group for lethal activity"Biochim.Biophys.Acta. 1454. 97-105 (1999)
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[Publications] 永浜政博: "Characterization of the enzymatic component of Clostridium perfringens iota-toxin"J.Bacteriol. 182(8). (2000)
