サイトメガロウイルス胎内感染による神経細胞死の発生機序に関する実験的研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670284
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 筒井 祥博 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50073135)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小杉 伊三夫 浜松医科大学, 医学部, 助手 (10252173) ; 馬場 聡 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (10242760)
• Keywords: サイトメガロウイルス / 胎内感染 / 神経細胞死 / アポトーシス

Research Abstract

1. マウスサイトメガロウイルス(MCMV)による発育期脳のアポトーシスの誘導:
胎生後期マウス脳にMCMVを感染させ、新生児マウス脳を取り出しTUNEL法によって大脳皮質および海馬の領域にアポトーシスが誘導されることを明らかにした。TUNEL法と神経特異抗原であるneuron-specific enoiase(NSE)、グリア細胞特異抗原であるGFAP、ミクログリアの特異抗原(F4/80)に対する抗体を用いた二重染色を行なった。NSE、GFAPと二重染色される細胞は数パーセント以下であったが、F4/80と二重染色される細胞は30%であった。またウイルス抗原と二重染色されるTUNEL陽性細胞も数パーセント以下で、MCMV感染脳においてこれらの領域の神経細胞が有意に減少した。
これらの結果よりアポトーシスの誘導される細胞はMCMVに直接感染した細胞でなく、MCMV感染によって間接的に生じ、ミクログリアによって責食される可能性を示した。初代培養神経細胞にMCMVを感染させると、血清除去あるいはグルタミン酸によって誘導されるアポトーシスが抑制されることを示した。
2. MCMV遺伝子前初期および早期遺伝子発現と神経系細胞株のアポトーシス誘導との関係:
マウス神経芽細胞腫由来のN18/TG2細胞にMCMV前初期遺伝子、早期遺伝子またはその発現ベクターを導入した細胞株を作成し、これらの細胞株に血清除去法でアポトーシスを誘導したところ、前初期遺伝子導入株においてアポトーシスが促進された。早期遺伝子導入細胞株においては影響を認めなかった。

Research Products

• [Publications] Kosugi I: "Murine cytomegalovirus induces apoptosis in non-infected cells of the developing mouse brain and blocks apoptosis in primary neuronal culture." Acta Neuropathologica. 96. 239-247 (1998)
• [Publications] Aiba-Masago S: "Murine cytomegalovirus immediate-early promoter directs astrocyte-specific expression in transgenic mice." American Journal of Pathology. 154・3(in press). (1999)
• [Publications] Tsutsui Y: "Neuronal migration disorders in cerebral palsy." Neuropathology. 18(in press). (1999)
• [Publications] 筒井 祥博: "マウスにおけるCMV胎内感染とその影響" 産婦人科の実際 特集サイトメガロウイルス(CMV)の母子感染. (in press). (1999)
• [Publications] 筒井 祥博: "Latent Infection Pathology(LIP)第4巻" 菜根出版(in press), (1999)