1998 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトヘルペスウイルス7型の抗原解析と宿主免疫反応の検討
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10670285
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
山田 雅夫 岡山大学, 医学部, 教授 (40166731)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大内 礼子 岡山大学, 医学部, 助手 (00304311)
磯村 寛樹 岡山大学, 医学部, 助手 (20294415)
難波 ひかる 岡山大学, 医学部, 助手 (20273972)
吉田 まり子 岡山大学, 医学部, 講師 (20144743)
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| Keywords | ヒトヘルペスウイルス7型 / 単クローン抗体 / ドットブロット中和抗体測定法 / HHV-6,-7の血清疫学 |
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| Research Abstract |
1. HHV-7に対する単クローン抗体(Mab)の作成と性状の解析:HHV-7のMRK株を抗原としてMabを作製した。認識ポリペプチドの同定は、^<35>Sメチオニンあるいは^<32>P正リン酸標識感染細胞lysateによる免疫沈降法にて行った。その結果、免疫沈降法にて抗原が同定された12個の抗HHV-7特異的MAbは、認識ポリペプチドの分子量により4群に分類された(125kDa,120kDa,78kDa,48kDa)。このうち120kDa,78kDaはリン酸化蛋白であった。HHV-7の125kDaの後期抗原を特異的に認識するMabはドットブロット法によるウイルス増殖の判定に有用であった。
2. ドットブロット中和抗体測定法の開発および各年齢層の抗HHV-7中和抗体の測定: ドットブロット法によるウイルス抗原の検出は、96穴プレート内の感染細胞lysateをDot blotterを用いてナイロン膜に移し、一次抗体として上記Mab、二次抗体としてアルカリフォスファターゼ標識抗マウスIgG抗体を用い、ケミルミネッセンス法で検出した。中和反応は、被験血清の2倍段階稀釈系列と各ウイルス液(500TCID_<50>/well)を混合し37度一時間中和反応の後、臍帯血リンパ球を加えて1週間培養し、感染の成立の有無を上記ドットブロット法で決定し、中和抗体価を求めた。今回確立したドットブロット中和法は、浮遊培養系のウイルスの中和抗体測定法として、簡便で客観性、再現性に優れており、この方法を用いたHHV-6,-7の血清疫学の展開が期待される。
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[Publications] Tsukazaki T. 他5名: "Deveropment of a dot-blot neutralizing assay for HHV-6 and -7 using specific monoclonal antibodies." J.Virol.Methods. 73. 141-149 (1998)
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[Publications] Yoshida M. 他6名: "Comparison of antiviral compounds against human herpesvirus-6 and-7." Antiviral Res.40. 73-84 (1998)
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[Publications] Kuzuya, M. 他12名: "Survey of human group C rotaviruses in Japan during the winter of 1992 to 1993" J. Clin. Micrbiol.36. 6-8 (1998)
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[Publications] 山田雅夫: "ヒトヘルペスウイルス6と7の比較生物学" ウイルス. 48. 39-44 (1998)
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[Publications] 山田雅夫: "ウイルスの潜伏感染と活性化 1.単純ヘルペスウイルスとその疾患" 治療学. 32. 597-601 (1998)
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[Publications] 山田雅夫: "ヘルペスウイルス6・7感染のトロピズム" 潜伏・持続感染 微生物と宿主の反応 第3巻「HHV-6、7の潜伏感染」(倉田、天野編)菜根出版,東京,. 107-116 (1998)
